人胰蛋白酶原-1和-2基因的克隆表達(dá)及胰蛋白酶原-2的活化.pdf

1、急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是臨床常見的急腹癥之一,近年來重型胰腺炎發(fā)病率逐漸增多,重型胰腺炎死亡率為20﹪,有并發(fā)癥者死亡率可高達(dá)50﹪.在急診條件下,快速診斷急性胰腺炎存在困難.目前通常采用檢測淀粉酶的水平,但其敏感性和特異性由于非高淀粉酶血癥的存在而不夠理想.最近有研究資料表明,急性胰腺炎病人血尿中胰蛋白酶原-2的水平顯著升高,可以作為檢測AP的指標(biāo).胰蛋白酶原-1,2均由247個(gè)氨基酸組成,其中1~1

2、5位氨基酸殘基為信號肽,16~23位氨基酸殘基為酶原活化成胰蛋白酶時(shí)被截去的活化肽(Trypsinogen activation peptide,TAP),序列為APFDDDDK.胰蛋白酶原的異位活化是急性胰腺炎的始發(fā)環(huán)節(jié),TAP作為胰蛋白酶原的激活產(chǎn)物是胰腺炎的早期預(yù)測和病情嚴(yán)重程度判斷很好的指標(biāo).在正常人血清中胰蛋白酶原-1的濃度較酶原-2高,胰腺炎時(shí)因炎癥導(dǎo)致胰蛋白酶原滲漏到血循環(huán)中,同時(shí)由于腎小管對酶原-1的重吸收大于酶原-2,

3、尿液中酶原-2的水平比正常值高出百倍,可以更靈敏而特異地檢測急性胰腺炎.胰蛋白酶原的基因工程表達(dá)目前國內(nèi)尚無報(bào)道.我們從人胰腺噬菌體cDNA文庫擴(kuò)增胰蛋白酶原-1和-2基因,通過對胰蛋白酶原-1和-2基因的5'端四個(gè)氨基酸堿基修改為大腸桿菌偏愛的密碼子,降低5'翻譯起始序列中G/C堿基含量,預(yù)測RNA二級結(jié)構(gòu)等一系列基因工程改造,成功構(gòu)建了蛋白C端帶有6×Histidine親和標(biāo)記的pBVTrpg-1和pBVTrpg-2表達(dá)載體,在大腸