七葉皂苷鈉抗大鼠腦出血后腦水腫作用機制的研究.pdf

1、腦出血(ICH)是神經(jīng)科的常見病和多發(fā)病，其腦損傷的病理生理機制還不十分明確，目前仍沒有切實有效的治療方法，因此臨床上腦出血所導(dǎo)致的死亡率和致殘率仍很高。腦水腫是腦出血后再損傷，病情惡化的主要原因之一，可通過妨礙腦組織的血供和神經(jīng)細胞內(nèi)環(huán)境的紊亂等加重神經(jīng)細胞損傷，嚴重地影響腦出血的預(yù)后。研究發(fā)現(xiàn)腦水腫與腦出血本身和血腦屏障(BBB)的破壞有關(guān)。血腦屏障緊密連接復(fù)合物和星形膠質(zhì)細胞是保持血腦屏障結(jié)構(gòu)和功能完整性的兩個重要因素。

2、七葉皂苷鈉(SA)是三萜皂苷的鈉鹽，是從中國藥典收藏的中藥婆羅子的干燥成熟果實中提取的。國外由德國藥典收藏的生藥歐馬栗的成熟果實中提取，具有糖皮質(zhì)激素抗?jié)B出、消腫及對抗磷酸組胺和緩激肽等炎性遞質(zhì)的作用，其作用為氫化可的松的七八倍，而且它還能恢復(fù)毛細血管的正常通透性。國內(nèi)有研究表明：β-七葉皂苷鈉注射液(10mg/kg/d)對大鼠急性脊髓損傷有明確的防治作用。本研究旨在通過觀察七葉皂苷鈉對大鼠腦出血后腦水腫發(fā)生時，緊密連接相關(guān)蛋白occl

3、udin和神經(jīng)膠質(zhì)原纖維蛋白(GFAP)陽性細胞的作用，進一步為臨床治療提供可靠的理論依據(jù)。 實驗方法： 1．建立大鼠腦出血模型。 2．測定大鼠腦組織含水量。 3．病理組織學(xué)觀察(H&E法)。 4．腦出血周圍組織超微結(jié)構(gòu)觀察。 5．免疫組化法檢測GFAP陽性細胞。 6．Western blot法檢測occludin的表達。 7．圖像分析 Western blot結(jié)果

4、用Chemi Imager 5500 V2.03軟件對X光膠片進行掃描，用Fluor Chem 2.0軟件測取感光區(qū)帶的IDV值。免疫組化結(jié)果用Motic ImagesAdvanced 3.2圖像分析系統(tǒng)采集照片，并進行定量分析。 8．統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS(statistical package for the social science)統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進行處理。各組實驗值以均數(shù)±標準差(SD)表示，計量資料兩組間與同組間

5、前后比較用Student's t檢驗，P<0.05視為有統(tǒng)計學(xué)意義。 實驗結(jié)果： 一、大鼠腦組織含水量測定模型組大鼠出血同側(cè)腦組織含水量于6h開始明顯升高，48h達高峰(平均含水量為83.52％)；出血對側(cè)僅于48h明顯升高。給予七葉皂苷鈉治療后，各時間點兩側(cè)腦組織含水量均明顯下降。 二、病理組織學(xué)觀察光鏡下，腦出血后24h血腫周圍可見神經(jīng)元胞體明顯腫脹，少量膠質(zhì)細胞增生，細胞間隙和血管周圍間隙增寬；48-72h

6、上述病變加重，并見大量神經(jīng)元胞核濃縮，胞質(zhì)紅染加深，細胞間隙出現(xiàn)大量空泡，膠質(zhì)細胞增生活躍。給予治療后，血腫周圍病變明顯減輕：24h時血腫周圍極少量膠質(zhì)細胞增生，細胞間隙和血管周圍間隙的增寬均不明顯；48-72h時，可見增生的膠質(zhì)細胞增多，神經(jīng)元胞體腫脹，細胞間隙和血管周圍間隙增寬很明顯，少量神經(jīng)元胞核濃縮，胞質(zhì)稍有紅染。 三、腦出血周圍組織超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果假手術(shù)組大鼠針孔周圍腦組織內(nèi)血管間的連接無明顯改變；模型組大鼠腦出血后4

7、8-72h，可見內(nèi)皮細胞間的緊密連接多處開放；毛細血管基底膜斷裂；星形細胞明顯腫脹，部分變性、壞死；毛細血管內(nèi)皮細胞腫脹，呈不規(guī)則向管腔突出，管腔變窄。給予七葉皂苷鈉治療后，明顯改善。 四、GFAP陽性細胞的改變假手術(shù)組大鼠針孔周圍腦組織僅有少量的GFAP陽性細胞；模型組大鼠腦出血后6h，血腫周圍和皮質(zhì)區(qū)GFAP陽性細胞均有明顯增多，于48-72h達高峰，且可見膠質(zhì)細胞明顯增生；給予七葉皂苷鈉治療后，各時間點的GFAP陽性細胞均

8、有明顯下調(diào)。 五、血腦屏障緊密連接相關(guān)蛋白occludin表達的變化與假手術(shù)組比，模型組大鼠血腫周圍腦組織在腦出血后6h，occludin表達無明顯改變；24h表達量明顯減少；48h表達量達最少。給予七葉皂苷鈉治療后，各時間點occludin的表達量均有不同程度的上調(diào)。討論腦出血是一種嚴重危害人類健康的疾病，腦水腫的發(fā)生是引起腦出血病情惡化的主要危險因素。目前認為治療腦出血的根本問題在于促進腦內(nèi)血腫的盡快吸收，控制腦水腫和減輕血

9、腫周圍繼發(fā)性神經(jīng)元的損害，這是腦出血急性期減少病死率、降低致殘率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。 結(jié)論： 1．本研究證實：大鼠腦出血后腦水腫時，出現(xiàn)血腫周圍腦組織occludin的表達抑制，提示occludin參與調(diào)節(jié)血腦屏障功能的穩(wěn)定性。 2．大鼠腦出血后血腫周圍GFAP陽性細胞的表達增強，48-72h達高峰，且可見明顯的細胞增生。 3．七葉皂苷鈉可以有效的緩解腦出血后occludin的表達抑制，并減弱GFAP陽性細胞