針刺對(duì)腦出血急性期大鼠腦損傷及腦水腫拮抗作用的機(jī)理研究.pdf

1、目的：探討針刺對(duì)腦出血急性期腦損傷及腦水腫拮抗作用的機(jī)理。本課題通過觀察“百會(huì)”透“曲鬢”頭針療法對(duì)急性腦出血大鼠腦組織形態(tài)學(xué)及腦組織中GDNF、MMP-9、AQP-4和VEGF表達(dá)的影響來揭示對(duì)腦損傷及腦水腫拮抗作用的相關(guān)機(jī)理,為治療急性腦出血的臨床方法奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：選取健康雄性Wistar大鼠320只(其中160只大鼠用于光鏡、電鏡、原位雜交和免疫組化測定,另160只大鼠只用于檢測腦水含量),隨機(jī)分為三組：模型組、針

2、刺組、西藥組,每組100只大鼠；每組再隨機(jī)分為6h、1d、2d、3d、7d五個(gè)亞組,每個(gè)亞組20只大鼠；制備腦出血模型；另設(shè)20只正常大鼠作為空白組。針刺組大鼠針刺患側(cè)“百會(huì)”透“曲鬢”穴。在光鏡和電鏡下觀察各組大鼠腦組織形態(tài)學(xué)改變；應(yīng)用干-濕重法測定各組大鼠腦水含量；運(yùn)用原位雜交及免疫組化等方法檢測各組大鼠腦組織中GDNF、MMP-9、AQP-4和VEGF陽性細(xì)胞的表達(dá)。 結(jié)果：1.光鏡下可見模型組血腫周圍腦組織壞死、水腫、炎

3、性細(xì)胞浸潤,神經(jīng)細(xì)胞核固縮、空泡化,毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血,3天時(shí)最嚴(yán)重。針刺組腦組織逐漸修復(fù),水腫程度較輕,炎性細(xì)胞減少。西藥組與模型組比較,改變不顯著。2.電鏡下可見模型組神經(jīng)細(xì)胞腫脹,染色質(zhì)凝聚成塊狀或核成溶解狀,線粒體腫脹、空泡化,嵴斷裂,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,多聚核糖體解聚,突觸結(jié)構(gòu)腫脹。針刺組較模型組神經(jīng)細(xì)胞腫脹減輕,線粒體結(jié)構(gòu)破壞較輕,突觸結(jié)構(gòu)較清晰。西藥組與模型組比較,改變不顯著。3.各造模組大鼠術(shù)后均出現(xiàn)不同程度的腦水腫現(xiàn)象。模

4、型組大鼠術(shù)后6h出現(xiàn)輕度腦水腫現(xiàn)象；3d腦水腫達(dá)高峰；7d仍有輕度腦水腫現(xiàn)象。針刺組較模型組和西藥組腦水腫程度減輕,與模型組比較在1d-7d時(shí)差異明顯(P<0.01);與西藥組比較在1d-3d時(shí)差異明顯(P<0.01)。西藥組較模型組腦水腫程度減輕,在1d-3d時(shí)差異明顯(P<0.01)。4.GDNF原位雜交方法檢測結(jié)果：各造模組大鼠術(shù)后均出現(xiàn)不同程度的GDNFmRNA陽性表達(dá)增多現(xiàn)象。模型組大鼠術(shù)后6h即出現(xiàn)較明顯的GDNFmRNA陽

5、性細(xì)胞表達(dá)增多現(xiàn)象；1d時(shí)達(dá)高峰；2d時(shí)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)；7d時(shí)接近正常。針刺組GDNF的表達(dá)明顯高于模型組和西藥組,在相同時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),7d時(shí)仍有很高表達(dá)。西藥組與模型組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。5.MMP-9免疫組化方法檢測結(jié)果：各造模組大鼠術(shù)后均出現(xiàn)不同程度的MMP-9陽性細(xì)胞表達(dá)增多現(xiàn)象。模型組大鼠術(shù)后6h即出現(xiàn)明顯的MMP-9表達(dá)增加；2d時(shí)達(dá)高峰；3d時(shí)出現(xiàn)緩慢下降；7d時(shí)MMP-9表

6、達(dá)仍高于空白組。針刺組MMP-9陽性細(xì)胞表達(dá)低于模型組和西藥組,與模型組比較在相同時(shí)間點(diǎn)均差異明顯(P<0.01);與西藥組比較在6h-2d時(shí)差異明顯(P<0.01)。西藥組MMP-9表達(dá)在1d-7d時(shí)低于模型組(P<0.01)。6.AQP-4免疫組化方法檢測結(jié)果：各造模組大鼠術(shù)后均出現(xiàn)不同程度的AQP-4陽性表達(dá)上升現(xiàn)象。模型組大鼠術(shù)后6h即出現(xiàn)AQP-4陽性細(xì)胞表達(dá)增多；3d時(shí)達(dá)高峰；7d時(shí)仍高于空白組。針刺組AQP-4表達(dá)低于模型

7、組和西藥組,在1d-3d時(shí)差異明顯(P<0.01)。西藥組與模型組比較,2d時(shí)稍有差異(P<0.05)。7.VEGF免疫組化方法檢測結(jié)果：各造模組大鼠術(shù)后均出現(xiàn)不同程度的VEGF陽性表達(dá)增多現(xiàn)象。模型組大鼠術(shù)后6h即出現(xiàn)大量的VEGF陽性細(xì)胞表達(dá)并出現(xiàn)第一個(gè)高峰；1d、2d出現(xiàn)緩慢下降態(tài)勢(shì)；3d突然增高并達(dá)峰值；7d時(shí)陽性表達(dá)仍高于空白組。在1d-3d時(shí)間點(diǎn),針刺組VEGF的表達(dá)明顯低于模型組(P<0.01);在7d時(shí)間點(diǎn),針刺組VEG

8、F陽性表達(dá)反而較模型組明顯增多(P<0.01)。西藥組與模型組比較,在7d時(shí)較模型組增多明顯(P<0.01)。 結(jié)論：1.“百會(huì)”透“曲鬢”頭針療法在腦出血急性期能明顯減輕神經(jīng)細(xì)胞損傷及超微結(jié)構(gòu)的破壞、減少炎性細(xì)胞浸潤、降低血腫周圍腦組織腦水腫程度,提示對(duì)腦組織損傷及腦水腫有拮抗作用。2.該方法可能在腦出血急性期通過促進(jìn)內(nèi)源性GDNFmRNA表達(dá)、抑制內(nèi)源性MMP-9和AQP-4表達(dá)、早期抑制VEGF的表達(dá)并后期促進(jìn)VEGF的表