預(yù)襯修飾脫鈣骨組織研究.pdf

1、目的： 采用去細(xì)胞加預(yù)襯修飾的方法來(lái)處理牛脫鈣骨，從而來(lái)了解其作為組織工程材料細(xì)胞黏附特性的變化。 方法： (1) 從黃牛長(zhǎng)骨兩端取出新鮮的松質(zhì)骨，按照煙臺(tái)正海生物技術(shù)有限公司、中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所制備脫鈣骨的方法進(jìn)行處理(申請(qǐng)?zhí)?專(zhuān)利號(hào)：200610080609)，從而得到實(shí)驗(yàn)中所需的牛脫鈣骨。 (2) 將牛脫鈣骨片截取成合適大小，采用多步驟去垢劑-酶消化法和光氧化交聯(lián)予以去細(xì)胞化處理；以纖

2、維連接蛋白(Fibronectin，F(xiàn)n)預(yù)襯為試驗(yàn)組，而磷酸緩沖液體組(PBS)預(yù)襯為對(duì)照組，采用物理包裹法(每組成分均以30μl的劑量)對(duì)脫鈣骨進(jìn)行預(yù)襯處理，共預(yù)襯處理去細(xì)胞化脫鈣骨片18片(裁剪每片面積約1 cm2)。 (3) 每片種植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞株細(xì)胞5×105，靜態(tài)培養(yǎng)7天，取1，4，7天標(biāo)本表面細(xì)胞記數(shù)，標(biāo)本切片HE染色，掃描電鏡和透射電鏡檢測(cè)，比較各處理組骨片表面細(xì)胞黏附數(shù)目、結(jié)合程度，來(lái)了解預(yù)處理方法對(duì)增強(qiáng)細(xì)

3、胞黏附性和促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。 結(jié)果： (1) 細(xì)胞記數(shù)：細(xì)胞培養(yǎng)7天，預(yù)襯組細(xì)胞數(shù)目明顯多于對(duì)照組(p<0.05)。 (2) 標(biāo)本石蠟包埋后切片HE染色結(jié)果：第1天各組表面細(xì)胞排列密集，紊亂，細(xì)胞核有堆積，部分呈雙層排布；第4天，對(duì)照組骨片表面細(xì)胞疏松，有成片分布；預(yù)襯組細(xì)胞連接成片，呈單層排布。第7天，預(yù)襯組細(xì)胞細(xì)胞鋪連成片，與下方纖維結(jié)構(gòu)有連接，未出現(xiàn)表皮脫落。 (3) 取7天標(biāo)本掃描電鏡顯示：對(duì)照