一株新型產(chǎn)纖維素酶菌株的鑒定、纖維素酶的分離純化、性質(zhì)分析和菌株應(yīng)用.pdf

1、對(duì)來(lái)自傳統(tǒng)發(fā)酵食物中的菌株進(jìn)行分離，得到一種具有高產(chǎn)纖維素酶活力的菌株。對(duì)該菌株所產(chǎn)纖維素酶進(jìn)行分離、純化、酶學(xué)性質(zhì)分析，并對(duì)豆渣發(fā)酵前后其營(yíng)養(yǎng)成分的變化和可溶性多糖提取進(jìn)行了初步研究。 對(duì)分離所得的菌株進(jìn)行菌絲和孢子顯微形態(tài)觀察，發(fā)現(xiàn)其形態(tài)具有面包串珠霉(MoniliasitophilaMont.)特征，初步推斷其為面包串珠霉，并將其命名為MC-1?？疾炝艘后w發(fā)酵面包串珠霉MC-1產(chǎn)纖維素酶的影響因素(培養(yǎng)基組成及產(chǎn)酶發(fā)酵條件

2、)。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)確定產(chǎn)酶培養(yǎng)基，得出較佳培養(yǎng)基組成為：0.3％碳源(稻草粉：甘蔗渣=4∶1)、2％氮源(酵母膏：蛋白胨=1∶2)、0.08％硫酸鎂和0.2％磷酸二氫鉀。通過(guò)對(duì)產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化，確定了菌株MC-1的較佳培養(yǎng)條件：孢子接種量10ml、培養(yǎng)溫度28-30℃、初始pH值4.8及培養(yǎng)時(shí)間為6天。 通過(guò)20％-65％的硫酸銨的分級(jí)沉淀、SephadexG-200凝膠層析、DEAE-SephadexA-25層析，分離得到1個(gè)

3、Cx酶、1個(gè)βG酶及1個(gè)C1酶三個(gè)組分。將提純得到的纖維素酶樣品和低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳，發(fā)現(xiàn)菌株MC-1產(chǎn)的C1，βG和Cx分子量分別為31.9KD，64.8KD和22.1KD。對(duì)此3種纖維素酶進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)分析，結(jié)果表明Cx酶最適溫度為45℃，在30～60℃條件下保持1h基本穩(wěn)定，最佳pH為5.0，在pH4.5～5.5范圍內(nèi)酶活基本穩(wěn)定；C1酶最適溫度為55℃，在30～60℃條件下保持1h基本穩(wěn)定，最佳pH為4.5，

4、在pH4.0～6.0范圍內(nèi)酶活基本穩(wěn)定；β-G酶最適溫度為60℃，在30℃～65℃條件下保持1h基本穩(wěn)定，最佳pH為4.5，在pH4.0～6.0范圍內(nèi)酶活基本穩(wěn)定。金屬離子對(duì)該三種酶活力有一定的影響，Mn2+對(duì)其均有顯著的促進(jìn)作用，Mn2+濃度為1～10mmol/L，C1酶活力提高150.8-955.3％，Cx酶活力提高117.4～300.8％，β-G酶活力提高106.1～737.8％；Li+對(duì)C1和Cx酶有抑制作用，而對(duì)β-G酶具有一

5、定的促進(jìn)作用；而Cu2+、Al3+、Zn2+、Ca2+和Cr3+對(duì)三種酶活力均為顯著的抑制作用。 豆渣經(jīng)面包串珠霉發(fā)酵前后，發(fā)現(xiàn)其異黃酮、粗纖維、蛋白質(zhì)、水溶性固形物等成分發(fā)生較大變化：發(fā)酵豆渣中的粗纖維的含量23.8％，與新鮮豆渣(35.5％)相比含量降低了35.2％；而水溶性固形物的含量高達(dá)36.98％，比新鮮豆渣(7.54％)升高了近5倍；異黃酮和蛋白質(zhì)的含量分別為0.66mg/g和32.59％，比新鮮豆渣(分別為0.60

6、mg/g和24.66％)升高了10％和32％。表明面包串珠霉可以顯著改變豆渣中營(yíng)養(yǎng)和功能性成分，改善其加工特性。 論文還研究了豆渣在面包串珠霉MC-1發(fā)酵前后總糖、還原糖及低聚糖的提取工藝，并對(duì)直接水浸提法、酶解法和液體發(fā)酵法提取可溶性糖進(jìn)行了比較。通過(guò)對(duì)單因素梯度實(shí)驗(yàn)結(jié)果，新鮮豆渣提取可溶性糖的浸提條件：1％氫氧化鈉溶液、浸提溫度為65℃、浸提時(shí)間為2h及固液比為1∶100。在此條件下，新鮮豆渣浸提后，總糖提取率為68.76m