鵝盲腸產(chǎn)纖維素酶細(xì)菌的分離鑒定及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、纖維素作為世界上最豐富的有機(jī)物質(zhì)，然而其資源并沒(méi)有得到充分的開(kāi)發(fā)利用，甚至有很大一部分纖維素變成環(huán)境污染物。關(guān)于有纖維素分解能力的微生物研究報(bào)道很多，這些微生物大部分是從植物殘?bào)w及土壤中分離的。從動(dòng)物腸道內(nèi)分離纖維素分解菌的研究很多，但多是從反芻動(dòng)物瘤胃中分離得到的。目前，關(guān)于鵝盲腸分解纖維素的細(xì)菌的研究很少。作為草食動(dòng)物的鵝，其對(duì)纖維素類物質(zhì)有很強(qiáng)的消化能力。因鵝的盲腸中棲息著很多微生物，所以部分學(xué)者認(rèn)為鵝盲腸和反芻動(dòng)物瘤胃一樣具有發(fā)

2、酵功能。為了充分利用纖維素，本實(shí)驗(yàn)對(duì)鵝盲腸纖維素分解菌進(jìn)行了分離鑒定，并優(yōu)化其發(fā)酵產(chǎn)酶的條件，研究酶的性質(zhì)，為該菌的應(yīng)用及研究奠定一定的基礎(chǔ)。
　　本試驗(yàn)隨機(jī)選6只揚(yáng)州白鵝，公母各一半。饑餓處理24 h，處死，取其盲腸，從其內(nèi)容物中分離出一株有纖維素分解能力的細(xì)菌，通過(guò)DNS法測(cè)定其發(fā)酵培養(yǎng)上清液酶活力值為1.25 U*mL-1。通過(guò)形態(tài)學(xué)和16SrDNA鑒定，并做系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，發(fā)現(xiàn)該菌株與解淀粉芽孢桿菌親緣關(guān)系最近，命名為 Bac

3、illus amyloliquefaciens S1。
　　通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)，對(duì)B. amyloliquefaciens S1產(chǎn)纖維素酶條件進(jìn)行優(yōu)化，得到其最適發(fā)酵條件：發(fā)酵溫度為37℃、發(fā)酵時(shí)間為72 h、發(fā)酵培養(yǎng)基起始pH為6.0、裝液量為75 mL/250 mL；各因素對(duì)B. amyloliquefaciens S1產(chǎn)酶能力影響的大小順序依次為：pH值>培養(yǎng)時(shí)間=培養(yǎng)溫度>裝液量。
　　研究B. amyloliqu

4、efaciens S1纖維素酶的酶學(xué)性質(zhì)，結(jié)果顯示，該菌所產(chǎn)纖維素酶的最適催化反應(yīng)溫度為60℃，pH為7，該酶耐熱，耐酸堿，對(duì)纖維素類物質(zhì)的分解作用較廣泛。Fe3+對(duì)該纖維素酶活力有一定的抑制作用，而K+、Cu2+、Fe2+、Mn2+和Zn2+對(duì)酶活力都有顯著的促進(jìn)作用。
　　試驗(yàn)克隆得到B. amyloliquefaciens S1的一種纖維素酶基因，該基因ORF片段大小為1500 bp，編碼499個(gè)氨基酸，該序列在Genban