藏雞三個(gè)生長(zhǎng)相關(guān)基因多態(tài)性研究暨Slc24a5基因與雞黑色素沉積關(guān)系初步研究.pdf

1、本論文由兩個(gè)部分組成:藏雞LEPR、IGF-2,MC4R基因SNP篩查及其與部分生長(zhǎng)性狀關(guān)聯(lián)分析；Slc24a5基因與雞黑色素沉積關(guān)系初步研究。
　　 第一部分:藏雞是我國(guó)以原始飼養(yǎng)狀態(tài)保存下來(lái)的珍貴的高原地方雞種,適應(yīng)長(zhǎng)期低壓、缺氧、低溫惡劣環(huán)境的藏雞有著初生生長(zhǎng)速度慢,成年個(gè)體小的顯著特點(diǎn)。一方面,藏雞同平原家禽一樣,生長(zhǎng)發(fā)育主要受腦垂體生長(zhǎng)軸以及采食能量代謝平衡系統(tǒng)控制；同時(shí),低氧環(huán)境也對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)有很大影響。為了揭示藏雞

2、獨(dú)特生長(zhǎng)特點(diǎn)的遺傳機(jī)制,本研究以腦垂體生長(zhǎng)軸上的IGF-2基因、控制能量代謝的MC4R基因,以及既參與調(diào)節(jié)能量代謝又與低氧適應(yīng)相關(guān)的LEPR基因作為控制藏雞生長(zhǎng)發(fā)育性狀主基因的候選基因,利用DNA混合池直接測(cè)序?qū)ふ覞撛趩魏塑账岫鄳B(tài)性(SNP),并采用PCR-RFLP,Mp-PCR,M-ASP方法對(duì)SNPs在藏雞和隱性白羽雞群體中進(jìn)行檢測(cè),分析這些基因的遺傳多樣性及突變位點(diǎn)在兩群體中基因型與等位基因分布趨勢(shì)。同時(shí)結(jié)合藏雞群體生長(zhǎng)發(fā)育性狀,

3、研究了3個(gè)基因不同基因型對(duì)藏雞生長(zhǎng)發(fā)育的可能影響。主要結(jié)果如下:
　　 1.對(duì)包含雞LEPR基因的leptin結(jié)合區(qū)(LBD)編碼區(qū)在內(nèi)的第7至14外顯子進(jìn)行了SNPs篩查,在該基因的第13外顯子和14外顯子上分別發(fā)現(xiàn)一個(gè)多態(tài)位點(diǎn):A1869T和A1921G。其中對(duì)于A1921G,3種基因型頻率在2個(gè)品種間存在極顯著差異(P<0.01)。與藏雞部分生長(zhǎng)性狀關(guān)聯(lián)分析表明,A1896T對(duì)藏雞的初生重、2周齡體重、7周齡體重、7周齡體

4、斜長(zhǎng)都有顯著影響,A1921G對(duì)藏雞的初生重、初脛圍、2周齡體重、2周齡脛圍、4周齡體重均有顯著影響,其中含有G等位基因個(gè)體的初生生長(zhǎng)性狀值顯著低于AA型個(gè)體。推測(cè)該位點(diǎn)氨基酸的改變(Thr641Ala)可能影響LEPR的LBD區(qū)與Leptin的結(jié)合。
　　 2.對(duì)IGF-2基因整個(gè)編碼區(qū)進(jìn)行了SNP分析,在該基因第2外顯子上發(fā)現(xiàn)一個(gè)同義突變A126T。與藏雞部分生長(zhǎng)性狀關(guān)聯(lián)分析表明,該位點(diǎn)對(duì)藏雞的2周齡脛圍有顯著影響,AA型個(gè)

5、體的第2周齡脛圍要顯著高于AG型與GG型個(gè)體。
　　 3.對(duì)MC4R基因整個(gè)編碼區(qū)進(jìn)行了SNP分析,發(fā)現(xiàn)一個(gè)同義突變G315T,并且發(fā)現(xiàn)在隱性白羽雞中沒(méi)有T等位基因的存在,而在藏雞中存在3種基因型的個(gè)體。與藏雞部分生長(zhǎng)性狀關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明,該位點(diǎn)對(duì)藏雞的7周齡體斜長(zhǎng)和16周齡脛圍均有顯著影響。GG型個(gè)體的7周齡體斜長(zhǎng)和16周齡脛圍均顯著大于其他GT型和TT型個(gè)體。
　　 第二部分:泰和烏骨雞是中國(guó)優(yōu)良的地方品種,除了有優(yōu)

6、質(zhì)肉蛋品質(zhì)外,烏骨雞與普通雞種最明顯的差異是烏骨雞體內(nèi)含有大量黑色素,雖然國(guó)內(nèi)外研究者對(duì)其體內(nèi)黑色素的沉積分布規(guī)律進(jìn)行了廣泛的研究,但對(duì)于控制其黑色素沉積規(guī)律的具體遺傳機(jī)制仍不清楚。最近,在斑馬魚(yú)和人中的研究表明,Slc24a5基因在控制膚色方面起重要作用,該基因可能通過(guò)其編碼區(qū)的堿基的突變而造成斑馬魚(yú)野生型和突變型以及黑人與白人膚色的差異。為了驗(yàn)證雞Slc24a5基因是否以類似的機(jī)制控制雞膚色的變化,本研究以泰合烏骨雞為材料,以體內(nèi)黑

7、色素沉積很少的尤溪麻雞作為對(duì)照,利用測(cè)序?qū)ふ以趦蓚€(gè)雞種間是否存在Slc24a5基因編碼區(qū)堿基差異,并研究了Slc24a5基因在兩雞種多個(gè)組織的表達(dá)情況以分析該基因與黑色素沉積的可能關(guān)系。初步結(jié)果如下:
　　 1.比較了兩個(gè)雞種6個(gè)個(gè)體(每品種3個(gè))Slc24a5基因編碼區(qū)的堿基序列。經(jīng)分析,沒(méi)有找到在兩品種間特異的堿基差異。說(shuō)明不同于人和斑馬魚(yú)中的研究,雞膚色差異并不是由該基因編碼區(qū)的堿基突變引起的。
　　 2.在兩雞種