念珠菌與黑色素相關(guān)性的初步研究.pdf

1、真菌一詞來源于拉丁文的“sfungus”，為蘑菇的意思。真菌在自然界中廣泛存在，據(jù)估計大約有150萬種，但是大多數(shù)真菌對人類有益，只有少數(shù)真菌對人類有害。由真菌引起的人類、動物疾病，稱為真菌病。真菌可通過感染、致敏等途徑導致人類和動物疾病。臨床上將真菌感染分為淺部真菌感染和深部真菌感染。淺部真菌感染為僅侵犯人體皮膚的角質(zhì)蛋白組織等一些淺部組織;深部真菌感染是指致病性真菌侵犯皮下組織、黏膜和內(nèi)臟所引起的真菌感染性疾病。深部真菌感染的發(fā)生取

2、決于病原體、宿主和環(huán)境多種因素的相互作用。
　　近幾十年來，隨著經(jīng)濟的不斷發(fā)展，糖皮質(zhì)激素、高效廣譜抗菌藥物、免疫抑制劑的大量應(yīng)用，干細胞移植、腫瘤的化療和其他介入性治療的普遍開展，以及艾滋病患者不斷的增加，由真菌引起的感染日趨增加，特別是呼吸系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)真菌感染明顯增多，成為院內(nèi)真菌感染增加的重要原因之一。引起深部感染的真菌主要包括:念珠菌屬、曲霉屬和隱球菌屬等，其中念珠菌屬占首位。念珠菌感染曾是白血病、接受干細胞移植或?qū)嶓w組

3、織移植患者的主要死因，現(xiàn)已成為ICU病人的主要感染源。在念珠菌屬中最常見的致病菌是白念珠菌（C.albicans），它在深部真菌感染中常占據(jù)第一位。但是近年來，念珠菌感染的類型同樣也發(fā)生了很大的變化。國內(nèi)外資料都顯示雖然念珠菌感染中白念珠菌仍然占第一位，但是白念珠菌感染的地位呈逐漸下降趨勢，非白念珠菌的感染呈逐年上升趨勢。深部念珠菌感染多為院內(nèi)獲得性感染，而且多數(shù)為重癥病人，一旦發(fā)生了全身感染，病死率非常高。深部念珠菌感染早期診斷非常困

4、難，即使診斷明確，對系統(tǒng)性感染的治療也非常困難。所以，了解真菌感染的流行病學知識，采取有效的預防及控制措施，對臨床醫(yī)生來說尤為重要。故為了解我院念珠菌感染的發(fā)病情況以及菌種分布特點等，本實驗收集本院2014年1月～2014年10月臨床送檢標本中念珠菌陽性標本進行統(tǒng)計分析，探討本院深部念珠菌病流行情況，希望對本院深部念珠菌病流行病學特點有一定的了解。
　　念珠菌的研究一直為熱點，特別是關(guān)于念珠菌的毒力問題。對念珠菌毒力因子的研究一般

5、主要集中在:酵母相和菌絲相之間的轉(zhuǎn)換，粘附和侵襲，生物被膜的形成，接觸傳感和向觸性，水解酶的分泌，熱休克蛋白，表型轉(zhuǎn)換等。關(guān)于念珠菌的毒力和黑色素之間關(guān)系的研究甚少。國外有研究發(fā)現(xiàn)念珠菌的毒力可能和黑色素有關(guān)。但其具體機制和相關(guān)因素尚不明確。
　　許多病原真菌致病性與黑色素緊密相關(guān)，如:煙曲霉、新生隱球菌、馬拉色菌、著色芽生菌等。黑色素是許多真菌在自然環(huán)境中生存的必需因子;它是許多真菌致病過程中的重要毒力因子，可以抵抗防御素、抗微

6、生物肽和吞噬細胞的吞噬作用。同時黑色素可以保護生物體不受輻射傷害，可以吸收紫外線、抗機體氧化等。黑色素能抵御日光、紫外線的輻射損傷，可以對抗真菌捕食者產(chǎn)生的細胞壁降解酶，有抗電離輻射作用。
　　由于國外關(guān)于念珠菌和黑色素關(guān)系的研究均局限于白念珠菌，且只用一種產(chǎn)黑培養(yǎng)基研究白念珠菌標準株，未對非白念珠菌和臨床分離念珠菌菌株進行研究。關(guān)于念珠菌和黑色素的關(guān)系國內(nèi)尚未見相關(guān)研究。故本實驗對收集分離的臨床念珠菌菌株，在三種產(chǎn)黑培養(yǎng)基上進行

7、培養(yǎng)，并通過觀察培養(yǎng)基顏色變化、菌株超微結(jié)構(gòu)和電子自旋共振波譜等方法探討臨床分離的念珠菌是否能產(chǎn)生黑色素。
　　1、院內(nèi)深部念珠菌感染標本的臨床分析
　　1.1、目的：
　　了解我院念珠菌感染的發(fā)病情況以及菌種分布、標本種類、疾病種類和科室分布特點等，探討本院念珠菌感染的流行病學因素，對院內(nèi)念珠菌感染的診斷和預防進行探討。
　　1.2、方法：
　　收集本院2014年1月～2014年10月的臨床送檢標本中念珠

8、菌陽性標本371例，分析其菌種分類、標本種類、疾病種類和科室分布等。
　　1.3、結(jié)果：
　　(1)371株深部念珠菌感染標本菌種分布
　　371株深部念珠菌感染標本分布和構(gòu)成比以白念珠菌175株最多(47.17％)、熱帶念珠菌73株(19.68％)、光滑念珠菌48株(12.94％)、克柔念珠菌28株(7.55％)、近平滑念珠菌26株(7.01％)、其他念珠菌21株(5.66％)。其中非白念珠菌所占比例為52.83％，

9、高于白念珠菌的比例47.17％。
　　(2)371株深部念珠菌感染標本性別分布
　　371株深部念珠菌感染標本中男性214例(57.68％);女性156例(42.05％)，性別間差異無統(tǒng)計學意義（x2=4.851，P=0.434＞0.05）。
　　(3)371株深部念珠菌感染標本來源及分布
　　371株深部念珠菌感染標本來源分布以痰最多145例(39.08％)，其次為中段尿71例(19.14％)、血液為62例(1

10、6.71％)、分泌物48例(12.94％)、其他45例(12.13％)。
　　(4)371株深部念珠菌感染標本人群分布
　　371株深部念珠菌感染標本在不同年齡人群中分布特點，其中年齡＜20歲12例(3.23％)，20～40歲64例(17.25％)，40～60歲103例(27.76％)，＞60歲的192例(51.75％)。以＜20歲年齡段最少，為12例(3.23％);＞60歲年齡段最多，192例(51.75％)。
　　

11、(5)371株深部念珠菌感染標本科室分布
　　371株深部念珠菌感染標本科室分布以呼吸內(nèi)科最多114例(30.73％);其次普外科103例(27.76％)、腫瘤科31例(8.36％)、神經(jīng)內(nèi)科19例(5.12％)、腎臟科17例(4.58％)、婦產(chǎn)科17例(4.58％)、血液科13例(3.50％)、消化內(nèi)科12例(3.23％)、其他45例(12.13％)。
　　(6)371株深部念珠菌感染患者相關(guān)基礎(chǔ)疾病分布
　　371

12、株深部真菌感染患者相關(guān)基礎(chǔ)疾病分布以呼吸系統(tǒng)疾病最多100例(26.95％);其次為消化系統(tǒng)疾病93例(25.07％)、泌尿系統(tǒng)疾病33例(8.89％)、外傷和術(shù)后32例(8.63％)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病29例(7.82％)、血液系統(tǒng)疾病17例(4.58％)、循環(huán)系統(tǒng)疾病15例(4.04％)、其他疾病52例(14.02％)。
　　1.4、結(jié)論：
　　(1)我院念珠菌感染中白念珠菌仍然是主要的病原真菌，但是非白念珠菌的總體比率已經(jīng)超

13、過了白念珠菌。
　　(2)臨床念珠菌感染標本中男性高于女性，但是差異無統(tǒng)計學意義。
　　(3)念珠菌感染中標本來源最主要的是痰，其次為中段尿，血液感染占第三位。血液感染中非白念珠菌所占比例為74.19％。
　　(4)念珠菌感染患者主要分布在呼吸內(nèi)科，其次為普外科;深部念珠菌感染患者基礎(chǔ)疾病最常見的為呼吸系統(tǒng)疾病。
　　(5)深部念珠菌感染的主要危險因素是:老年人，體弱多病，長期使用廣譜抗生素、免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激

14、素，惡性腫瘤以及外科手術(shù)等。
　　2、念珠菌與黑色素相關(guān)性的初步研究
　　2.1、目的：
　　對第一部份收集分離的臨床念珠菌菌株，在三種產(chǎn)黑培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，并通過觀察培養(yǎng)基顏色變化、菌株超微結(jié)構(gòu)和電子自旋共振波譜等方法探討臨床分離的念珠菌是否能產(chǎn)生黑色素。
　　2.2、方法：
　　(1)在三種產(chǎn)黑培養(yǎng)基上培養(yǎng)臨床送檢標本中分離到的念珠菌菌株371株、白念珠菌標準株SC5314和新生隱球菌標準株H99。分別

15、于第3d、5d、7d、10d觀察培養(yǎng)基及菌落顏色變化，并拍照。
　　(2)對新生隱球菌、變色最明顯的SC5314和臨床念珠菌做透射電鏡，電鏡下觀察超微結(jié)構(gòu)
　　(3)對變色最明顯的SC5314測其電子自旋共振波譜信號
　　2.3、結(jié)果：
　　(1)培養(yǎng)基上菌落顏色變化結(jié)果
　　新生隱球菌在三種培養(yǎng)基上在3d左右時就開始變?yōu)樽睾稚?，?d、7d時變?yōu)楹谏?SC5314在第5d時，在多巴和添加了多巴的基本培養(yǎng)基

16、上變棕褐色，第7d時，多巴培養(yǎng)基上變黑色，基本培養(yǎng)基上為棕褐色;371株臨床念珠菌中，有12株在第10d時，在多巴培養(yǎng)基上變棕褐色（陰道4株、口腔3株、中段尿3株、血液1株、引流液1株）;15株在基本培養(yǎng)基上變棕褐色（陰道5株、中段尿5株、口腔4株、血液1株）;且全為白念珠菌.
　　(2)透射電鏡結(jié)果
　　產(chǎn)黑的新生隱球菌在透射電子顯微鏡下看到在細胞壁外有一層高電子致密層，SC5314和變色的臨床念珠菌在細胞壁外層未看到類似