念珠菌與黑色素相關(guān)性的初步研究.pdf

1、真菌一詞來(lái)源于拉丁文的“sfungus”，為蘑菇的意思。真菌在自然界中廣泛存在，據(jù)估計(jì)大約有150萬(wàn)種，但是大多數(shù)真菌對(duì)人類有益，只有少數(shù)真菌對(duì)人類有害。由真菌引起的人類、動(dòng)物疾病，稱為真菌病。真菌可通過(guò)感染、致敏等途徑導(dǎo)致人類和動(dòng)物疾病。臨床上將真菌感染分為淺部真菌感染和深部真菌感染。淺部真菌感染為僅侵犯人體皮膚的角質(zhì)蛋白組織等一些淺部組織;深部真菌感染是指致病性真菌侵犯皮下組織、黏膜和內(nèi)臟所引起的真菌感染性疾病。深部真菌感染的發(fā)生取

2、決于病原體、宿主和環(huán)境多種因素的相互作用。
　　近幾十年來(lái)，隨著經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，糖皮質(zhì)激素、高效廣譜抗菌藥物、免疫抑制劑的大量應(yīng)用，干細(xì)胞移植、腫瘤的化療和其他介入性治療的普遍開(kāi)展，以及艾滋病患者不斷的增加，由真菌引起的感染日趨增加，特別是呼吸系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)真菌感染明顯增多，成為院內(nèi)真菌感染增加的重要原因之一。引起深部感染的真菌主要包括:念珠菌屬、曲霉屬和隱球菌屬等，其中念珠菌屬占首位。念珠菌感染曾是白血病、接受干細(xì)胞移植或?qū)嶓w組

3、織移植患者的主要死因，現(xiàn)已成為ICU病人的主要感染源。在念珠菌屬中最常見(jiàn)的致病菌是白念珠菌（C.albicans），它在深部真菌感染中常占據(jù)第一位。但是近年來(lái)，念珠菌感染的類型同樣也發(fā)生了很大的變化。國(guó)內(nèi)外資料都顯示雖然念珠菌感染中白念珠菌仍然占第一位，但是白念珠菌感染的地位呈逐漸下降趨勢(shì)，非白念珠菌的感染呈逐年上升趨勢(shì)。深部念珠菌感染多為院內(nèi)獲得性感染，而且多數(shù)為重癥病人，一旦發(fā)生了全身感染，病死率非常高。深部念珠菌感染早期診斷非常困

4、難，即使診斷明確，對(duì)系統(tǒng)性感染的治療也非常困難。所以，了解真菌感染的流行病學(xué)知識(shí)，采取有效的預(yù)防及控制措施，對(duì)臨床醫(yī)生來(lái)說(shuō)尤為重要。故為了解我院念珠菌感染的發(fā)病情況以及菌種分布特點(diǎn)等，本實(shí)驗(yàn)收集本院2014年1月～2014年10月臨床送檢標(biāo)本中念珠菌陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，探討本院深部念珠菌病流行情況，希望對(duì)本院深部念珠菌病流行病學(xué)特點(diǎn)有一定的了解。
　　念珠菌的研究一直為熱點(diǎn)，特別是關(guān)于念珠菌的毒力問(wèn)題。對(duì)念珠菌毒力因子的研究一般

5、主要集中在:酵母相和菌絲相之間的轉(zhuǎn)換，粘附和侵襲，生物被膜的形成，接觸傳感和向觸性，水解酶的分泌，熱休克蛋白，表型轉(zhuǎn)換等。關(guān)于念珠菌的毒力和黑色素之間關(guān)系的研究甚少。國(guó)外有研究發(fā)現(xiàn)念珠菌的毒力可能和黑色素有關(guān)。但其具體機(jī)制和相關(guān)因素尚不明確。
　　許多病原真菌致病性與黑色素緊密相關(guān)，如:煙曲霉、新生隱球菌、馬拉色菌、著色芽生菌等。黑色素是許多真菌在自然環(huán)境中生存的必需因子;它是許多真菌致病過(guò)程中的重要毒力因子，可以抵抗防御素、抗微

6、生物肽和吞噬細(xì)胞的吞噬作用。同時(shí)黑色素可以保護(hù)生物體不受輻射傷害，可以吸收紫外線、抗機(jī)體氧化等。黑色素能抵御日光、紫外線的輻射損傷，可以對(duì)抗真菌捕食者產(chǎn)生的細(xì)胞壁降解酶，有抗電離輻射作用。
　　由于國(guó)外關(guān)于念珠菌和黑色素關(guān)系的研究均局限于白念珠菌，且只用一種產(chǎn)黑培養(yǎng)基研究白念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株，未對(duì)非白念珠菌和臨床分離念珠菌菌株進(jìn)行研究。關(guān)于念珠菌和黑色素的關(guān)系國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)相關(guān)研究。故本實(shí)驗(yàn)對(duì)收集分離的臨床念珠菌菌株，在三種產(chǎn)黑培養(yǎng)基上進(jìn)行

7、培養(yǎng)，并通過(guò)觀察培養(yǎng)基顏色變化、菌株超微結(jié)構(gòu)和電子自旋共振波譜等方法探討臨床分離的念珠菌是否能產(chǎn)生黑色素。
　　1、院內(nèi)深部念珠菌感染標(biāo)本的臨床分析
　　1.1、目的：
　　了解我院念珠菌感染的發(fā)病情況以及菌種分布、標(biāo)本種類、疾病種類和科室分布特點(diǎn)等，探討本院念珠菌感染的流行病學(xué)因素，對(duì)院內(nèi)念珠菌感染的診斷和預(yù)防進(jìn)行探討。
　　1.2、方法：
　　收集本院2014年1月～2014年10月的臨床送檢標(biāo)本中念珠

8、菌陽(yáng)性標(biāo)本371例，分析其菌種分類、標(biāo)本種類、疾病種類和科室分布等。
　　1.3、結(jié)果：
　　(1)371株深部念珠菌感染標(biāo)本菌種分布
　　371株深部念珠菌感染標(biāo)本分布和構(gòu)成比以白念珠菌175株最多(47.17％)、熱帶念珠菌73株(19.68％)、光滑念珠菌48株(12.94％)、克柔念珠菌28株(7.55％)、近平滑念珠菌26株(7.01％)、其他念珠菌21株(5.66％)。其中非白念珠菌所占比例為52.83％，

9、高于白念珠菌的比例47.17％。
　　(2)371株深部念珠菌感染標(biāo)本性別分布
　　371株深部念珠菌感染標(biāo)本中男性214例(57.68％);女性156例(42.05％)，性別間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=4.851，P=0.434＞0.05）。
　　(3)371株深部念珠菌感染標(biāo)本來(lái)源及分布
　　371株深部念珠菌感染標(biāo)本來(lái)源分布以痰最多145例(39.08％)，其次為中段尿71例(19.14％)、血液為62例(1

10、6.71％)、分泌物48例(12.94％)、其他45例(12.13％)。
　　(4)371株深部念珠菌感染標(biāo)本人群分布
　　371株深部念珠菌感染標(biāo)本在不同年齡人群中分布特點(diǎn)，其中年齡＜20歲12例(3.23％)，20～40歲64例(17.25％)，40～60歲103例(27.76％)，＞60歲的192例(51.75％)。以＜20歲年齡段最少，為12例(3.23％);＞60歲年齡段最多，192例(51.75％)。
　　

11、(5)371株深部念珠菌感染標(biāo)本科室分布
　　371株深部念珠菌感染標(biāo)本科室分布以呼吸內(nèi)科最多114例(30.73％);其次普外科103例(27.76％)、腫瘤科31例(8.36％)、神經(jīng)內(nèi)科19例(5.12％)、腎臟科17例(4.58％)、婦產(chǎn)科17例(4.58％)、血液科13例(3.50％)、消化內(nèi)科12例(3.23％)、其他45例(12.13％)。
　　(6)371株深部念珠菌感染患者相關(guān)基礎(chǔ)疾病分布
　　371

12、株深部真菌感染患者相關(guān)基礎(chǔ)疾病分布以呼吸系統(tǒng)疾病最多100例(26.95％);其次為消化系統(tǒng)疾病93例(25.07％)、泌尿系統(tǒng)疾病33例(8.89％)、外傷和術(shù)后32例(8.63％)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病29例(7.82％)、血液系統(tǒng)疾病17例(4.58％)、循環(huán)系統(tǒng)疾病15例(4.04％)、其他疾病52例(14.02％)。
　　1.4、結(jié)論：
　　(1)我院念珠菌感染中白念珠菌仍然是主要的病原真菌，但是非白念珠菌的總體比率已經(jīng)超

13、過(guò)了白念珠菌。
　　(2)臨床念珠菌感染標(biāo)本中男性高于女性，但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(3)念珠菌感染中標(biāo)本來(lái)源最主要的是痰，其次為中段尿，血液感染占第三位。血液感染中非白念珠菌所占比例為74.19％。
　　(4)念珠菌感染患者主要分布在呼吸內(nèi)科，其次為普外科;深部念珠菌感染患者基礎(chǔ)疾病最常見(jiàn)的為呼吸系統(tǒng)疾病。
　　(5)深部念珠菌感染的主要危險(xiǎn)因素是:老年人，體弱多病，長(zhǎng)期使用廣譜抗生素、免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激

14、素，惡性腫瘤以及外科手術(shù)等。
　　2、念珠菌與黑色素相關(guān)性的初步研究
　　2.1、目的：
　　對(duì)第一部份收集分離的臨床念珠菌菌株，在三種產(chǎn)黑培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，并通過(guò)觀察培養(yǎng)基顏色變化、菌株超微結(jié)構(gòu)和電子自旋共振波譜等方法探討臨床分離的念珠菌是否能產(chǎn)生黑色素。
　　2.2、方法：
　　(1)在三種產(chǎn)黑培養(yǎng)基上培養(yǎng)臨床送檢標(biāo)本中分離到的念珠菌菌株371株、白念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株SC5314和新生隱球菌標(biāo)準(zhǔn)株H99。分別

15、于第3d、5d、7d、10d觀察培養(yǎng)基及菌落顏色變化，并拍照。
　　(2)對(duì)新生隱球菌、變色最明顯的SC5314和臨床念珠菌做透射電鏡，電鏡下觀察超微結(jié)構(gòu)
　　(3)對(duì)變色最明顯的SC5314測(cè)其電子自旋共振波譜信號(hào)
　　2.3、結(jié)果：
　　(1)培養(yǎng)基上菌落顏色變化結(jié)果
　　新生隱球菌在三種培養(yǎng)基上在3d左右時(shí)就開(kāi)始變?yōu)樽睾稚?，?d、7d時(shí)變?yōu)楹谏?SC5314在第5d時(shí)，在多巴和添加了多巴的基本培養(yǎng)基

16、上變棕褐色，第7d時(shí)，多巴培養(yǎng)基上變黑色，基本培養(yǎng)基上為棕褐色;371株臨床念珠菌中，有12株在第10d時(shí)，在多巴培養(yǎng)基上變棕褐色（陰道4株、口腔3株、中段尿3株、血液1株、引流液1株）;15株在基本培養(yǎng)基上變棕褐色（陰道5株、中段尿5株、口腔4株、血液1株）;且全為白念珠菌.
　　(2)透射電鏡結(jié)果
　　產(chǎn)黑的新生隱球菌在透射電子顯微鏡下看到在細(xì)胞壁外有一層高電子致密層，SC5314和變色的臨床念珠菌在細(xì)胞壁外層未看到類似