甘薯膨大生長相關(guān)基因的初步研究.pdf

1、能源已成為影響全球經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重要問題，中國是能源缺乏和能源消耗大國，合理開發(fā)、利用生物能源尤其是糧食酒精是探索新型可再生能源的一種途徑。甘薯具有很高的生物質(zhì)產(chǎn)量，在生產(chǎn)燃料方面具有獨(dú)到的優(yōu)勢。因此對甘薯進(jìn)行深入的研究，提高淀粉含量和產(chǎn)量顯得尤為重要。 本論文利用分子生物學(xué)手段研究與甘薯膨大生長相關(guān)的候選基因，最后獲得了如下結(jié)果： 1、建立了一套適合于甘薯的改良CTAB法提取總RNA的技術(shù)體系。針對甘薯組織中富含多糖多酚的特

2、點(diǎn)，改進(jìn)了CTAB法，采用β-巰基乙醇和PVP去除酚類，KAc及無水乙醇去除多糖，皂土吸附蛋白和抑制RNA酶活性，LiCl沉淀，提取得到的RNA產(chǎn)率高，電泳條帶整齊、清晰，符合后續(xù)分子實(shí)驗(yàn)要求。 2、建立了甘薯cDNA-AFLP分析的反應(yīng)體系。通過優(yōu)化AFLP擴(kuò)增體系，發(fā)現(xiàn)，酶切時使用Buffer Y+/TANGO TM緩沖液在37℃酶切3h后再65℃酶切3h的效果最佳；最佳體系擴(kuò)增體系為預(yù)擴(kuò)30μl、選擴(kuò)20μl，反應(yīng)程序?yàn)椋?/p>

3、94℃預(yù)變性2min，94℃變性30s，65℃退火1min(-0．7℃/cycle)，72℃延伸1min，共12個循環(huán)；其后94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸1min，共23個循環(huán)，最后72℃延伸5min然后4℃保溫。 3、確定了一種簡易的銀染方法并得到了31組差異片段：在對4種銀染方法進(jìn)行比較后我們利用效果較好的方法一進(jìn)行條件優(yōu)化，通過對不同的溫度和pH以及試劑的試驗(yàn)，最終確立了一種較為簡單、經(jīng)濟(jì)、快速而且效果不錯