活性炭灌胃對(duì)百草枯中毒胃腸道吸收影響的初步研究.pdf

1、目的:百草枯(Paraquat，PQ)中毒已成為我國(guó)最常見(jiàn)的農(nóng)藥中毒之一，PQ中毒目前仍無(wú)特效解毒藥，故早期毒物清除尤為重要。目前臨床上主要采用洗胃、利尿、導(dǎo)瀉等方法進(jìn)行毒物清除，洗胃后采用活性炭灌胃吸附目前尚處于探討中，是否有效尚缺乏循證醫(yī)學(xué)依據(jù)，為此，本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討活性炭混懸液灌胃對(duì)PQ染毒大鼠血漿、肺組織中的PQ濃度及對(duì)肺組織氧化-抗氧化指標(biāo)、炎性因子的影響。
　　方法:經(jīng)由中至重度PQ中毒患者口服量換算，并通

2、過(guò)一系列預(yù)實(shí)驗(yàn)，證實(shí)大鼠染毒后的行為表現(xiàn)及大體死亡率與臨床上中重度患者相似，最終確定大鼠PQ灌服量為200mg/kg。活性炭混懸液的給予時(shí)間及劑量亦是根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果及實(shí)驗(yàn)的可操作性決定的。
　　實(shí)驗(yàn)采用SPF級(jí)成年健康雄性Wistar大鼠90只，體重在160g-200g（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院繁殖及飼養(yǎng)，許可證號(hào)為SCXK（軍）2007-004）。將其隨機(jī)分為8h組、24h組及48h組三組，每組30只，全部大鼠采用PQ200mg/kg灌

3、胃染毒。每組再隨機(jī)分為五組，每組6只大鼠，包括對(duì)照組（僅染毒）、實(shí)驗(yàn)組1（染毒后10min予活性炭混懸液400mg/kg灌胃）、實(shí)驗(yàn)組2（染毒后30min予活性炭混懸液400mg/kg灌胃）、實(shí)驗(yàn)組3（染毒后10min予活性炭混懸液1000mg/kg灌胃）、實(shí)驗(yàn)組4(染毒后30min予活性炭混懸液1000mg/kg灌胃)。各組分別于染毒后8h、24h、48h放血處死大鼠留取肺組織檢測(cè)肺組織中PQ濃度、氧化-抗氧化因子及炎性因子含量。48

4、h組在染毒后0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、24h、48h于大鼠眼眶靜脈叢取血檢測(cè)血漿中PQ濃度。
　　結(jié)果:1）測(cè)定生物樣品中PQ含量的高效液相色譜法的建立:實(shí)驗(yàn)采用1100型高效液相色譜分析儀及phenomenex Pheny1-Henxy1色譜柱(250*4.6mm，5μm)，色譜條件如下:流動(dòng)相∶乙腈(acetonitrile，ACN)∶0.2％三氟乙酸(trifluoroacetic acid，TFA):1mmo

5、l/L十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate，SDS)=30∶40∶30;流速:1.2 ml/min;進(jìn)樣量:20μl;檢測(cè)時(shí)間:8min;檢測(cè)波長(zhǎng):258nm。本方法檢測(cè)PQ在0.5μg/ml～100μg/ml范圍內(nèi)線性良好，定量下限為0.5μg/ml。該方法的準(zhǔn)確度和精密度結(jié)果如下，PQ三種濃度下的日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation，RSD)均小于15％，相對(duì)誤差(r

6、elativeerror，RE)為0.25％-17.32％，滿足方法學(xué)的要求。穩(wěn)定性結(jié)果如下:血漿樣品于-20℃放置7天、-20℃放置反復(fù)凍融3次、室溫放置6h、儲(chǔ)備液于4℃存儲(chǔ)7天均穩(wěn)定。
　　2)大鼠染毒后給予活性炭灌胃對(duì)血漿PQ濃度的影響:全血離心后取上清液進(jìn)行PQ濃度檢測(cè)。結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組大鼠血漿PQ濃度顯著低于對(duì)照組(p=0.0052)，且各實(shí)驗(yàn)組之間兩兩比較差別亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)組3大鼠血漿PQ濃度顯著低于其他各組;

7、相同時(shí)間點(diǎn)上各實(shí)驗(yàn)組大鼠血漿PQ濃度顯著低于對(duì)照組(p＜0.0001)，且各實(shí)驗(yàn)組之間兩兩比較差別亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)組3大鼠血漿PQ濃度顯著低于其他各組;實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，血漿PQ濃度隨時(shí)間變化趨勢(shì)也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.0001)。各組血漿PQ濃度數(shù)據(jù)經(jīng)擬合后得各組毒物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)，其中峰濃度（maximum concentration，Cmax）及平均保留時(shí)間(mean retention time，MRT)各組數(shù)據(jù)之間無(wú)差異

8、(p值分別為0.9750、0.1217)。各組大鼠時(shí)間-PQ濃度曲線下面積(area under curve，AUC)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.0048)，經(jīng)兩兩比較，實(shí)驗(yàn)組1、3、4曲線下面積顯著低于對(duì)照組，且實(shí)驗(yàn)組3曲線下面積顯著低于其他各組。
　　3)大鼠染毒后給予活性炭灌胃對(duì)肺組織PQ濃度影響:取左肺下段加入3倍蒸餾水制備肺組織勻漿，離心后取上清液進(jìn)行肺組織PQ濃度檢測(cè)。結(jié)果顯示:8h組中各組大鼠肺組織PQ濃度差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

9、意義(p=0.1004);24h組及48h組中對(duì)照組與其他各實(shí)驗(yàn)組之間肺組織PQ濃度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p值分別為0.0080、0.0251），實(shí)驗(yàn)組肺組織PQ濃度顯著低于對(duì)照組，各實(shí)驗(yàn)組之間兩兩比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4)大鼠染毒后活性炭灌胃對(duì)肺組織中氧化-抗氧化指標(biāo)的影響:取右肺下段按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行肺組織超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量檢測(cè)。結(jié)果顯示:8h組中各組大鼠肺組織SOD濃度、MDA濃度差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

10、意義（p值分別為0.7141、0.5975）;雖然24h和48h各實(shí)驗(yàn)組大鼠肺組織SOD濃度要高于對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p值分別為0.1943、0.3112）;與對(duì)照組相比，24h和48h各實(shí)驗(yàn)組大鼠肺組織MDA濃度同樣無(wú)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p值分別為0.0512、0.2788）。
　　5)大鼠染毒后活性炭灌胃對(duì)肺組織中TNF-α濃度的影響:取右肺下段按照試劑盒步驟進(jìn)行腫瘤壞死因子(TNF-α)含量檢測(cè)，結(jié)果顯示:8h組及48h組中各

11、組大鼠肺組織TNF-α濃度差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p值分別為0.7619、0.3617）;24h組中實(shí)驗(yàn)組2與其它各組之間肺組織TNF-α濃度差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.0027)。
　　結(jié)論:活性炭灌胃可有效減少PQ的胃腸道吸收率;且PQ染毒后活性炭灌胃時(shí)間越早、灌服量越大，PQ的胃腸道吸收率越低，且PQ的血漿濃度下降越快;給予活性炭混懸液灌胃可顯著降低24h及48h肺組織PQ濃度，但對(duì)8h肺組織PQ濃度無(wú)顯著影響;給予活性炭混懸液灌胃