辛伐他汀對人牙髓細胞增殖及堿性磷酸酶活性的影響.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨立完成。本學(xué)位論文研究所獲的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔相應(yīng)的法律責任。研究生簽名：氍瑩導(dǎo)師簽章：渺二級學(xué)院簽蘆J弓年弓河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨

2、創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研究生簽名：勘耋導(dǎo)師簽名：i蜴竅加f≥年弓月矽Et中文摘要辛伐他汀對人牙髓細胞增殖及堿性磷酸奠活性的影響摘要目的：本試驗采用體外細胞培養(yǎng)的方法，探討辛伐他汀對體外培養(yǎng)人牙髓細胞(humandentalpulpcells，HDPCs)的細胞增殖、礦

3、化、細胞周期及堿性磷酸酶(ALP)活性的影響。方法：選擇年齡為1828歲新鮮拔除的健康、完整、無齲、無隱裂的恒牙或第三磨牙(河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院口腔外科提供)。采用組織塊酶解法培養(yǎng)細胞。待細胞長出后在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及生長情況。細胞傳代成功后，取第4代對數(shù)生長期人牙髓細胞進行細胞爬片，用SABC法進行波形絲蛋白和角蛋白免疫組織化學(xué)染色，鑒定細胞來源。MTT比色法檢測辛伐他汀對人牙髓細胞增殖能力的影響：1)選用第4代生長良好的牙髓

4、細胞，制備lxl04／ml的細胞懸液，接種于96孔板，每孔100lxl。2)細胞長滿孔底后，棄去孔中的培養(yǎng)液，用PBS浸洗細胞。3)實驗分為對照組、空白對照組和實驗組，每組設(shè)5個孔。對照組：在有細胞的孔內(nèi)加入1501xl完全培養(yǎng)液(含2％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液)。空白對照組：在無細胞的孔內(nèi)加入150“1的完全培養(yǎng)液。實驗組：在有細胞的孔內(nèi)分別加入150p1用完全培養(yǎng)液配制的終末濃度分別為lO。9mol／L，10。8mol／L，10

5、0n101／L和10。6mol／L的辛伐他汀溶液。4)分別培養(yǎng)至第ld、5d時，棄孔中培養(yǎng)液，以PBS沖洗，在所需檢測的培養(yǎng)孔內(nèi)每孔加入四甲基偶氮唑鹽(MAT)溶液(5mg／mL)20止，37。C下繼續(xù)孵育4h，終止培養(yǎng)，吸棄孔內(nèi)上清液，在每孔分別加入1001xL二甲基亞砜(DMSO)，室溫下輕微振蕩5min。以空白對照孔調(diào)零，選擇492nlil波長，在酶標儀上檢測各孔吸光度值(A)。檢測辛伐他汀對人牙髓細胞堿性磷酸酶(ALP)活性的影