裸鼠肌肉移植瘤模型對研究鼻咽癌亞臨床灶意義.pdf

1、目的：以人鼻咽癌CNE1細(xì)胞系為例建立的balb/c裸鼠肌肉內(nèi)移植瘤模型，觀察高分化細(xì)胞系CNE1在體內(nèi)的生物學(xué)行為及生長侵襲能力，為下一步研究鼻咽高分化癌亞臨床灶在活體內(nèi)的顯像建立合適的動(dòng)物模型。此動(dòng)物模型的移植瘤需無包膜，腫瘤細(xì)胞較易向周圍組織侵襲，以便于我們對移植瘤周圍正常組織中侵襲的單個(gè)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性的研究。
　　 材料：人鼻咽癌CNE1細(xì)胞株（LMP1表達(dá)陽性）；胎牛血清；RPMI-1640培養(yǎng)基、胰蛋白酶；LM

2、P1（CS1-4）單克隆抗體；pEGFP-C1質(zhì)粒；梭華-SofastTM轉(zhuǎn)染試劑；質(zhì)粒抽提試劑盒（V-gene）；SABC二抗試劑盒；4-6周齡balb/c裸鼠；TJ-TY-500型全自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)；超凈細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室及SPF層流動(dòng)物房。
　　 方法：體外培養(yǎng)LMP1陽性表達(dá)的CNE1細(xì)胞系，細(xì)胞爬片后固定，免疫熒光證實(shí)LMP1的表達(dá)清情況。pEGFP-C1質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染CNE1細(xì)胞系,篩選穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白的細(xì)胞克隆并擴(kuò)大

3、培養(yǎng),做流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡檢測。動(dòng)物分為三組，分別將帶有pEGFP基因的細(xì)胞株、不帶有EGFP基因的細(xì)胞株擴(kuò)增后制成濃度為1.0×107細(xì)胞懸液,將不帶EGFP基因的細(xì)胞株于半小時(shí)內(nèi)分別種植于兩組balb/c 裸鼠臀大肌或背部皮下；將帶EGFP基因的細(xì)胞株于半小時(shí)內(nèi)種植于第三組balb/c 裸鼠臀大肌內(nèi)。定期觀察并測量移植瘤大小，待有裸鼠瀕臨死亡時(shí)處死全部裸鼠取標(biāo)本，4%多聚甲醛固定后石蠟包埋，做連續(xù)石蠟切片，第三組裸鼠相鄰切片分別

4、做冰凍切片、蘇木素-伊紅（HE）和免疫組化染色。圖像分析以及熒光顯微鏡觀察并比較腫瘤細(xì)胞浸潤及轉(zhuǎn)移情況。
　　 結(jié)果：皮下移植瘤潛伏期長，生長較慢，腫瘤體積小，腫瘤周圍可見明顯包膜包繞；肌肉移植瘤腫瘤細(xì)胞向周圍組織侵襲明顯，腫瘤組織和周圍正常組織界限不清，周圍淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率較皮下移植瘤高。組織切片可見肌肉組織內(nèi)癌巢形成,并且有癌細(xì)胞侵入肌細(xì)胞現(xiàn)象；不帶有EGFP基因的兩組細(xì)胞株進(jìn)行比較，皮下移植瘤平均潛伏期為（15.40±2

5、.46），腫瘤倍增時(shí)間為（3.01±0.32），平均瘤重（1.13±0.15），淋巴結(jié)和肝臟轉(zhuǎn)移率低（41.7%）。而肌肉組移植瘤體內(nèi)平均潛伏期(11.92±2.02d)和瘤體平均倍增時(shí)間(2.32±0.24d)明顯縮短(P<0.01)，平均瘤重明顯增加(1.32±0.17g，P<0.05)，淋巴結(jié)和肝臟轉(zhuǎn)移率明顯增高(41.7%/100%,P<0.05),而成瘤率無顯著差異(83.3%/100%,P>0.05)。
　　 EGF

6、P在裸鼠體內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)，且不影響細(xì)胞在體內(nèi)的增值與轉(zhuǎn)移，移植瘤重量為（1.33±0.11g），潛伏期為（10.98±2.21），倍增時(shí)間為（2.29±0.62），與未傳染EGFP組無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。冰凍切片在熒光顯微鏡下直接觀察，較容易直接區(qū)分腫瘤區(qū)與非腫瘤區(qū)，并能發(fā)現(xiàn)向周圍侵襲的腫單個(gè)腫瘤細(xì)胞，其敏感性及特異性明顯優(yōu)于HE染色和免疫組化方法。
　　 結(jié)論：鼻咽癌高分化細(xì)胞系CNE1的裸鼠肌肉移植瘤模型在體內(nèi)的生長侵襲能力強(qiáng)，腫瘤