抗人IgM抗體抑制鼻咽癌HNE-1細(xì)胞裸鼠成瘤的機(jī)制研究.pdf

1、目的:目前,隨著各種診斷方式的更新及治療方法的進(jìn)步,鼻咽癌的5年生存率有了一定提高但是仍不理想,早期診斷仍較困難,治療效果仍欠佳。在前期研究中,發(fā)現(xiàn)免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)M在多種頭頸部腫瘤包括鼻咽癌中存在廣泛表達(dá),利用抗人IgM抗體干預(yù)后,人鼻咽癌HNE-1細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)受到明顯抑制,并能促進(jìn)其凋亡。Ig對(duì)人鼻咽癌HNE-1細(xì)胞裸鼠移植瘤具有生長(zhǎng)因子樣作用,能夠促進(jìn)其生長(zhǎng),但其具體機(jī)制還尚不明確。隨著對(duì)腫

2、瘤形成機(jī)制的深入研究,人們發(fā)現(xiàn)血管生成與腫瘤的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切,抗血管生成治療也成為腫瘤治療中的重要組成部分之一。本實(shí)驗(yàn)是在前期研究的基礎(chǔ)上,獲取人鼻咽癌HNE-1細(xì)胞裸鼠移植瘤組織標(biāo)本,通過(guò)檢測(cè)移植瘤組織增殖指標(biāo)以及血管生長(zhǎng)相關(guān)指標(biāo),生存素-Survivin、增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、血管生成素-2(angiopoietin,Ang-2),移植瘤內(nèi)微血管密度(m

3、icrovessel density,MVD),進(jìn)一步探討抗人IgM抗體抑制人鼻咽癌HNE-1細(xì)胞裸鼠成瘤的可能機(jī)制,為鼻咽癌發(fā)病機(jī)制的研究及臨床治療方案提供新的思路。
　　方法:取人鼻咽癌HNE-1細(xì)胞裸鼠移植瘤組織,用含1％蜂蠟的石蠟包埋組織,輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)將其切成4μm厚的病理切片,應(yīng)用免疫組化鏈霉親和素-生物素化過(guò)氧化酶復(fù)合物染色法(Streptoavidin-biotin-enzyme complex,SABC)檢測(cè)瘤體組

4、織中Survivin、PCNA、Ang-2表達(dá)情況;應(yīng)用免疫組化鏈霉親和堿性磷酸酶染色法(Streptavidin-Alkaline Phosphatase,SAP)檢測(cè)CD31標(biāo)記的移植瘤內(nèi)微血管,并計(jì)數(shù)MVD表達(dá)情況。(1)Survivin,PCNA:陽(yáng)性染色呈黃色至棕黃色,前者主要位于胞膜或胞質(zhì);后者陽(yáng)性染色部位主要位于細(xì)胞核。每張染色切片在Olympus BH2顯微鏡下,低倍鏡(×100)隨機(jī)選擇染色明顯的5個(gè)視野,高倍鏡(×4

5、00)下采圖,共5張切片,每張切片采集5張圖片,采用Image-pro Plus6.0軟件對(duì)Survivin,PCNA陽(yáng)性染色的病理圖片作免疫組化半定量分析,記錄平均光密度值。(2)Ang-2:Ang-2陽(yáng)性染色呈棕黃色,主要位于細(xì)胞漿或細(xì)胞膜。由兩位醫(yī)師分別觀(guān)察每張切片,選擇有代表性的區(qū)域,用OLYMPUS BH2顯微鏡在高倍鏡下(×400)對(duì)切片進(jìn)行攝像,共5張切片,每張切片采集5張圖片,采用Image-pro Plus6.0軟件對(duì)

6、采集的Ang-2陽(yáng)性染色切片作免疫組化半定量分析,記錄平均光密度值。(3) MVD計(jì)數(shù):陽(yáng)性染色(CD31標(biāo)記)呈鮮紅色至紅色顆粒,主要位于血管內(nèi)皮細(xì)胞膜,陰性染色為藍(lán)色。計(jì)數(shù)方法參考Weidner[18]的方法進(jìn)行,先尋找染色清楚的瘤體內(nèi)微血管,在染色密集區(qū)域?qū)ふ?低倍鏡,×40),然后在200倍鏡(20×10)下計(jì)數(shù)腫瘤內(nèi)的微血管數(shù)目,包括毛細(xì)血管和靜脈數(shù)目,瘤旁組織內(nèi)微血管不計(jì)數(shù),記錄5個(gè)視野內(nèi)的微血管數(shù),取平均值,結(jié)果以(x-±

7、s)表達(dá)。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS16.0 for windows軟件作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析, P<0.05顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:(1)Survivin、PCNA表達(dá)情況,抗人IgM抗體干預(yù)實(shí)驗(yàn)組Survivin、PCNA的平均光密度值分別為(0.153±0.009)、(0.084±0.025),IgG組Survivin、PCNA表達(dá)的平均光密度值為(0.221±0.019)、(0.149±0.016),PBS對(duì)照組Survivin

8、、PCNA表達(dá)的平均光密度為(0.246±0.021)、(0.163±0.018),實(shí)驗(yàn)組(抗人IgM抗體干預(yù))組Survivin和PCNA陽(yáng)性表達(dá)的結(jié)果顯著低于IgG組和PBS對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(2) Ang-2、MVD表達(dá)情況,抗人IgM抗體干預(yù)組Ang-2表達(dá)的平均光密度值為(0.121±0.021),IgG組Ang-2表達(dá)的平均光密度值為(0.188±0.013),PBS對(duì)照組的平均光密度為(0.196±

9、0.005),實(shí)驗(yàn)組(抗人IgM抗體干預(yù))Ang-2陽(yáng)性表達(dá)的結(jié)果顯著低于IgG組和PBS對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);MVD表達(dá)情況,抗人IgM抗體干預(yù)組MVD為(12.54±0.47),顯著低于IgG組(16.95±0.21)及PBS對(duì)照組(17.17±0.47),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:(1)抗人IgM抗體可以顯著抑制人鼻咽癌HNE-1細(xì)胞裸鼠移植瘤內(nèi)Survivin、PCNA及A