富硒女貞子對(duì)熱應(yīng)激乳腺、卵巢組織及其細(xì)胞的影響.pdf

1、熱應(yīng)激是指動(dòng)物機(jī)體處于高溫環(huán)境中所做出的非特異性生理反應(yīng)的總和，本研究團(tuán)隊(duì)的前期成果表明，富硒女貞子對(duì)熱應(yīng)激性免疫失衡和自由基爆發(fā)性損傷具有顯著療效，在此基礎(chǔ)上，本文探究富硒女貞子對(duì)熱應(yīng)激雌性小鼠乳腺、卵巢組織發(fā)育的影響，并從細(xì)胞水平探索富硒女貞子對(duì)細(xì)胞熱應(yīng)激的干預(yù)作用，為闡明富硒女貞子抗熱應(yīng)激的分子機(jī)理打下基礎(chǔ)。
　　試驗(yàn)一 富硒女貞子對(duì)熱應(yīng)激雌鼠乳腺及卵巢組織的影響
　　探討富硒女貞子對(duì)熱應(yīng)激小鼠乳腺以及卵巢組織發(fā)育的影

2、響，試驗(yàn)選取16只C57BL/6雌鼠，隨機(jī)分為4組:對(duì)照組(C)、熱應(yīng)激組(HS)、富硒女貞子組(SLL)、普通女貞子(PLL)組。C組小鼠于T:25±1℃室溫下飼養(yǎng);其他3組小鼠于每天13:00-14:00置于生化培養(yǎng)箱內(nèi)(通氣良好，T:41±1℃，RH:50-60％)應(yīng)激1h，期間不間斷供水供藥，其中SLL組小鼠飼喂0.75g/Kg富硒女貞子水煎液，PLL組小鼠飼喂1.5g/Kg普通女貞子水煎液。其余時(shí)間與C組同環(huán)境條件下飼養(yǎng)，連續(xù)

3、應(yīng)激7d，最后一次應(yīng)激后1h剖殺，采集乳腺、卵巢組織，制作石蠟切片，H.E染色、觀察。結(jié)果表明，HS組小鼠乳腺組織中發(fā)育的腺泡和導(dǎo)管明顯少于C組，而SLL組小鼠乳腺組織中發(fā)育的腺泡和導(dǎo)管較HS組明顯增多。此外，HS組小鼠卵巢中卵泡數(shù)量較C組顯著減少（P＜0.05），而SLL組小鼠卵巢中卵泡數(shù)量較HS組有所增多，但差異并不顯著（P＞0.05）。結(jié)果提示，富硒女貞子對(duì)熱應(yīng)激引起的小鼠乳腺及卵巢組織發(fā)育不良有明顯的改善作用。
　　試驗(yàn)二

4、 富硒女貞子對(duì)乳腺及卵巢細(xì)胞增殖活性的影響
　　以富硒女貞子水煎液及其主要成分蛋白質(zhì)、齊墩果酸、多糖為試驗(yàn)材料，探究其對(duì)體外培養(yǎng)的乳腺上皮細(xì)胞、卵巢細(xì)胞增殖活性的影響。采用MTT法測(cè)定富硒女貞子水煎液及其主要成分對(duì)乳腺上皮細(xì)胞、卵巢細(xì)胞生長(zhǎng)的安全濃度，并測(cè)定在安全濃度下12h、24h、36h、48 h時(shí)間點(diǎn)各藥物對(duì)乳腺上皮細(xì)胞、卵巢細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果表明，富硒女貞子水煎液、蛋白質(zhì)及齊墩果酸對(duì)乳腺上皮細(xì)胞的增殖活性具有促進(jìn)作用，而

5、富硒女貞子多糖并沒(méi)有表現(xiàn)類(lèi)似作用，且當(dāng)濃度達(dá)到20μg/mL時(shí)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)表現(xiàn)出抑制作用;富硒女貞子水煎液、蛋白質(zhì)、多糖、齊墩果酸均能促進(jìn)卵巢細(xì)胞增殖活性。
　　試驗(yàn)三 富硒女貞子對(duì)熱應(yīng)激乳腺上皮細(xì)胞增殖、凋亡及抗氧化功能的影響
　　為探究富硒女貞子及其主要成分對(duì)高溫體外培養(yǎng)乳腺上皮細(xì)胞增殖、凋亡及抗氧化功能的影響。以42℃作為熱應(yīng)激溫度，37℃作為對(duì)照溫度。于42℃培養(yǎng)的乳腺上皮細(xì)胞分別添加不同濃度的富硒女貞子水煎液、齊墩

6、果酸、蛋白質(zhì)，檢測(cè)細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞凋亡比例及細(xì)胞培養(yǎng)上清中SOD活性。結(jié)果表明，各濃度的富硒女貞子水煎液、齊墩果酸及蛋白質(zhì)均能顯著提高熱應(yīng)激狀態(tài)下乳腺上皮細(xì)胞的增殖活性(P＜0.05)、顯著降低細(xì)胞的凋亡率(P＜0.05)、顯著提高細(xì)胞培養(yǎng)上清中SOD的活性（P＜0.05），且富硒女貞子組明顯優(yōu)于普通女貞子組。結(jié)果提示，富硒女貞子水煎液、齊墩果酸及蛋白質(zhì)對(duì)熱應(yīng)激引起的乳腺細(xì)胞增殖活性降低及細(xì)胞凋亡有明顯的改善作用，并能提高熱應(yīng)激狀態(tài)下

7、乳腺細(xì)胞的抗氧化功能。
　　試驗(yàn)四 富硒女貞子對(duì)熱應(yīng)激卵巢細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡及抗氧化的影響
　　為探究富硒女貞子及其主要成分對(duì)高溫體外培養(yǎng)卵巢細(xì)胞增殖、凋亡及抗氧化功能的影響。按上述細(xì)胞熱應(yīng)激模型和檢測(cè)方法試驗(yàn)，結(jié)果表明，富硒女貞子水煎液及多糖能顯著提高熱應(yīng)激狀態(tài)下卵巢細(xì)胞的增殖活性(P＜0.05)、顯著降低細(xì)胞的凋亡率（P＜0.05）、顯著提高細(xì)胞培養(yǎng)上清中SOD的活性(P＜0.05)，且富硒女貞子組明顯優(yōu)于普通女貞子組;而富