基于核磁共振氫譜的人胰腺癌組織代謝組學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　研究胰腺癌組織、癌旁組織和正常胰腺組織代謝組的差異，分析其可能存在的機(jī)制和臨床意義，發(fā)現(xiàn)潛在的診斷生物標(biāo)志物和治療靶點，為尋找胰腺癌的生物標(biāo)志物奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、按照腫瘤組納入標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn)收集手術(shù)切除的胰腺導(dǎo)管腺癌組織32例，癌旁組織16例；按照正常對照組的納入標(biāo)準(zhǔn)收集手術(shù)切除的正常胰腺組織27例。將采集的上述標(biāo)本置于-80℃冰箱保存。
　　2、將采集的組織稱重、研磨后用氯仿-甲醇法萃

2、取，所得的上清液經(jīng)24小時凍干后形成凍干粉。
　　3、將凍干粉溶解于核磁檢測液后在Varian NMR System500MHz核磁共振儀檢測，采集核磁共振圖譜。
　　4、使用 TopSpin軟件(V3.0)對譜圖進(jìn)行傅立葉變換，相位調(diào)整，基線校正及提高信噪比等處理，再以乳酸在1.33 ppm處的雙峰定標(biāo)，積分區(qū)間為9.5-0.5 ppm，積分間距為0.002 ppm，歸一化后的積分?jǐn)?shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為Excel數(shù)據(jù)格式，用于模式識別

3、分析。
　　5、采用SIMCA-P+軟件對積分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析、最小二乘法-判別分析及偏最小二乘法-判別分析，并對所建立的模型進(jìn)行交叉驗證和排列試驗驗證。
　　6、對通過過驗證顯示穩(wěn)定有效的模型進(jìn)一步經(jīng)OPLS-DA分析及皮爾森相關(guān)系數(shù)顯著性差異檢測判定，研究腫瘤組和正常對照組的內(nèi)源性代謝差異。
　　結(jié)果：
　　1、癌組織組和正常對照組數(shù)據(jù)在PCA中呈現(xiàn)很好的聚集性，建立判別模型，經(jīng)PLS-DA交叉驗證和排列試

4、驗驗證，建模穩(wěn)定有效。
　　2、經(jīng) OPLS-DA分析及皮爾森相關(guān)系數(shù)顯著性差異檢測判定，相比與正常胰腺組織，3-甲基組氨酸、3-甲基化黃嘌呤衍生物、4-羥基安息香酸鹽、乙酰膽堿、腺嘌呤、ADP、丙氨酸、AMP/ADP、AMP、天冬氨酸、ATP、甜菜堿、乙醇胺、富馬酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、GPC、次黃嘌呤、肌苷、賴氨酸、肌醇、維生素 PP、NAA、NAD、苯丙氨酸、丙酮酸、肌氨酸、琥珀酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、尿嘧啶、尿嘧

5、啶核苷、UDG、黃嘌呤的含量降低，3-羥基丁酸、甲酸、谷氨酸、乳酸、煙酰酸、牛磺酸的含量升高。
　　3、癌旁組織組和癌組織組，癌旁組織組和正常對照組在PCA中未呈現(xiàn)明顯的聚集性，建立判別模型，經(jīng)PLS-DA交叉驗證和排列試驗驗證，建模不夠理想。
　　結(jié)論：
　　1、胰腺癌組與正常對照組代謝組學(xué)建模穩(wěn)定，二者在能量代謝、氨基酸代謝、磷脂及核酸代謝存在明顯的差異。
　　2、基于核磁共振氫譜和PCA/PLS-DA的代謝