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文檔簡(jiǎn)介
1、研究目的:
利用RNA測(cè)序(RNA sequencing,RNA-Seq)技術(shù),研究HIV-1轉(zhuǎn)基因大鼠及經(jīng)過尼古丁處理的F344大鼠在前額葉皮質(zhì)(prefrontal cortex,PFC)、紋狀體(dorsal striatum,STR)和海馬體(dorsal hippocampus,HIP)三個(gè)大腦區(qū)域中的基因表達(dá),并考察尼古丁對(duì)HIV-1轉(zhuǎn)基因大鼠三個(gè)大腦區(qū)域的基因表達(dá)的影響。
研究方法:
1.24
2、只雄性成年HIV-1轉(zhuǎn)基因大鼠和24只雄性成年對(duì)照品系F344大鼠分別隨機(jī)分為處理組和對(duì)照組,每組12只,分別注射尼古丁水溶液或生理鹽水17天,共分為四組,分別是F344鹽水對(duì)照組、F344尼古丁處理組、HIV-1 Tg鹽水對(duì)照組和HIV-1 Tg尼古丁處理組。
2.藥物處理結(jié)束后,從每只大鼠大腦采集PFC、STR和HIP組織。然后采用RNA-Seq技術(shù)對(duì)48只大鼠大腦PFC、STR和HIP區(qū)域的mRNA進(jìn)行測(cè)序,測(cè)出的讀段利
3、用Bowtie、Tophat及Cufflinks等生物信息學(xué)工具比對(duì)到參考基因組上并測(cè)量轉(zhuǎn)錄子表達(dá)水平。
3.采用RPKM方法估計(jì)基因表達(dá)水平,并以FPKM值為對(duì)象,利用t檢驗(yàn)一方面確定在F344尼古丁處理組和F344鹽水對(duì)照組發(fā)生顯著變化的基因,另一方面確定在HIV-1 Tg鹽水對(duì)照組和F344鹽水對(duì)照組發(fā)生顯著變化的基因。另外利用方差分析考察品系(HIV-1轉(zhuǎn)基因大鼠vs F344大鼠)與處理效應(yīng)(尼古丁vs鹽水)之間的交
4、互作用,并進(jìn)一步利用t檢驗(yàn)考察尼古丁處理對(duì)于HIV-1轉(zhuǎn)基因大鼠的基因表達(dá)的影響?;诤Y選出的差異表達(dá)基因,利用Onto-Express確定差異表達(dá)基因所富集的Gene Ontology分類,并利用IPA確定差異表達(dá)基因所參與的生物學(xué)通路。
研究結(jié)果:
1.通過分析每個(gè)轉(zhuǎn)錄子在F344鹽水對(duì)照組和F344尼古丁處理組的表達(dá)水平,確定了PFC、STR和HIP區(qū)域在尼古丁影響下的表達(dá)水平顯著變化的基因分別有50、50和3
5、83個(gè)。在這些基因中,與多個(gè)GO富集分類如離子傳輸、轉(zhuǎn)錄調(diào)控及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等以及IPA通路如蛋白激酶A信號(hào)通路、ERK/MAPK信號(hào)通路、突觸長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)及線粒體功能障礙等相關(guān)的基因顯著富集。
2.通過分析每個(gè)轉(zhuǎn)錄子在F344鹽水對(duì)照組和HIV-1 Tg鹽水對(duì)照組的表達(dá)水平,確定了HIV-1轉(zhuǎn)基因大鼠中在PFC、STR和HIP區(qū)域表達(dá)水平顯著變化的基因分別有245、385和139個(gè)。在這些基因中,與多個(gè)GO富集分類如免疫反應(yīng)、轉(zhuǎn)錄調(diào)
6、控、離子運(yùn)輸、神經(jīng)遞質(zhì)代謝及DNA損傷應(yīng)答等以及IPA通路如多巴胺受體信號(hào)通路、Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路、靶細(xì)胞凋亡、干擾素信號(hào)通路及LXR/RXR通路等相關(guān)的基因均顯著富集。
3.通過對(duì)F344鹽水對(duì)照組、F344尼古丁處理組、HIV-1 Tg鹽水對(duì)照組和HIV-1 Tg尼古丁處理組這四組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,確定了品系和處理效應(yīng)之間存在交互作用。通過比較每個(gè)轉(zhuǎn)錄子在F344鹽水對(duì)照組和HIV-1 Tg鹽水對(duì)照組以及HI
7、V-1 Tg鹽水對(duì)照組和HIV-1 Tg尼古丁處理組的表達(dá)水平,確定了在HIV-1轉(zhuǎn)基因大鼠的PFC、STR和HIP區(qū)域中差異表達(dá)同時(shí)受到尼古丁修復(fù)作用的基因分別有23、13和11個(gè),包括Rps20、Ndufa4以及Fgf9等。
研究結(jié)論:
1.尼古丁通過改變某些基因的表達(dá),可以調(diào)節(jié)大腦PFC、STR和HIP區(qū)域中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控及離子運(yùn)輸?shù)榷鄠€(gè)過程,從而引起神經(jīng)功能障礙。
2.HIV-1轉(zhuǎn)基因大鼠中,大
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