CEP135表達(dá)與精子活力及精子DNA損傷的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：精子活力低下所導(dǎo)致的弱精癥是男性不育的重要原因之一,深入探討弱精癥的發(fā)生機(jī)制、提出新的治療策略是國(guó)內(nèi)外生殖領(lǐng)域的一個(gè)研究熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)測(cè)定弱精癥精子細(xì)胞的活力、DNA損傷率及中心小體蛋白135(centrosomal protein135kDa,CEP135)的相關(guān)表達(dá)量,并探討CEP135表達(dá)與精子活力和精子DNA損傷率之間的相互關(guān)系,以確定CEP135在弱精癥診療過(guò)程中的指導(dǎo)價(jià)值,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　

2、方法：應(yīng)用計(jì)算機(jī)輔助精液分析對(duì)91例精液樣本進(jìn)行參數(shù)檢測(cè),按照WHO標(biāo)準(zhǔn),根據(jù)(a+b)級(jí)精子百分率分為3組,Ⅰ組31例:(a+b)級(jí)精子>50％或a級(jí)精子>25%;Ⅱ組30例:(a+b)級(jí)精子25%~50%;Ⅲ組30例:(a+b)級(jí)精子<25%。利用精子染色質(zhì)擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)(Sperm chromatin dispersion test,SCD)檢測(cè)各組精子細(xì)胞的DNA損傷率。逆轉(zhuǎn)錄-實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse transcrip

3、tion-quantitative real-time PCR,RT-qPCR)檢測(cè) CEP135信使 RNA(Messenger RNA,mRNA)在三組精液中的表達(dá)情況,采用2-ΔCT公式(ΔCT=CT目的-CT內(nèi)參)計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量（Relative expression,Re),瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證 RT-qPCR的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。應(yīng)用 SPSS16.0軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并對(duì)精子細(xì)胞的活力、DNA損傷率及CEP135 mRNA的相對(duì)表

4、達(dá)量進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：3組精液中精子細(xì)胞的活力分別為62.31%±7.97%、36.63%±6.61%、16.51%±6.57%,DNA損傷率分別為17.18%±6.72%、22.86%±6.67%、27.30%±6.44%,CEP135 mRNA的平均相對(duì)表達(dá)量分別為9.45×10-2±2.64×10-4、9.48×10-2±3.24×10-4、9.49×10-2±2.52×10-4,各組之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

5、<0.05)。DNA損傷率及 CEP135 mRNA的相對(duì)表達(dá)量均與精子細(xì)胞的活力呈顯著負(fù)相關(guān)(r分別為-0.619,-0.574;P均<0.01);隨著CEP135 mRNA相對(duì)表達(dá)量的升高,DNA損傷率也逐漸增加,二者之間顯著正相關(guān)(r=0.316;P<0.01)。
　　結(jié)論：弱精癥精液中高表達(dá)的CEP135mRNA與精子細(xì)胞活力的降低及DNA損傷率的增高密切相關(guān),具有顯著相關(guān)性。臨床上可以通過(guò)測(cè)定精子細(xì)胞CEP135mRNA