BMSCs來(lái)源的EXOSOME抗細(xì)胞凋亡作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討低氧處理BMSCs獲得的exosome抗細(xì)胞凋亡作用機(jī)制。
　　方法：準(zhǔn)備無(wú)exosome的血清，利用超速離心法（120000g7h）去除掉血清中的exosome保證實(shí)驗(yàn)用的血清無(wú)exosome的干擾。比較超速離心、ExoQuick-TC試劑盒和改良試劑盒三種方法提取的exosome，建立exosome有效提取方法。exosome抗細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)分三組：①對(duì)照組（Control）加入PBS液；②正常組（Normal）：加入

2、正常培養(yǎng)BMSCs上清液中的exosome；③低氧組（Hypoxia）加入低氧培養(yǎng)BMSCs上清液中的exosome；將上述培養(yǎng)成分加入BMSCs中，放在含5%氧氣的低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)三天，分別用流式細(xì)胞儀測(cè)定三組BMSCs的凋亡率。將細(xì)胞凋亡信號(hào)通路圖中的119個(gè)基因在exosome數(shù)據(jù)庫(kù)中(包含2127中RNA)經(jīng)過(guò)篩選得到5個(gè)重要基因。對(duì)篩選出的基因進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，接著分別提取低氧和正常培養(yǎng)來(lái)源的exosomes中的RNA并立即反轉(zhuǎn)錄

3、為cDNA，使用熒光定量PCR檢測(cè)兩種exosomes中所篩選基因的相對(duì)表達(dá)量差別，試圖從基因?qū)用嫣接慹xosome抗細(xì)胞凋亡的機(jī)制。
　　結(jié)果：①超速離心法獲得的exosome濃度是55.29ug/ml，試劑盒提取的exosome濃度是393ug/ml，改良法提取的exosome濃度是2028ug/ml，改良法提取的exosome濃度明顯高于其它兩種方法。②對(duì)照組中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的凋亡率是93.3%，正常組中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的

4、凋亡率是61%，低氧組中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是31.2%，低氧處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源exosome細(xì)胞凋亡率明顯低于正常組和對(duì)照組；③結(jié)合細(xì)胞凋亡信號(hào)通路圖從exosome數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選出5個(gè)重要基因：loc298795(14-3-3-sigma)、TSC2、caspase-6、FASL、Calpain；④熒光定量PCR測(cè)定低氧組exosome所包含的基因loc298795(14-3-3-sigma)表達(dá)量較其它組高，而TSC2和caspa