MBL抗綿羊肺炎支原體感染過(guò)程中相關(guān)免疫因子的變化.pdf

1、綿羊支原體肺炎（Mycoplasmal pneumonia，MP），是動(dòng)物傳染性疾病中影響較嚴(yán)重的疾病。近年來(lái)在新疆呈爆發(fā)性流行，給畜牧業(yè)帶來(lái)了一定的損失。甘露聚糖結(jié)合凝集素（Mannose- binding lectin，MBL）是肝臟合成分泌到血液中抗感染的天然免疫分子，它在抗原抗體產(chǎn)生特異性反應(yīng)之前，能激活誘導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng)，被看成是天然免疫系統(tǒng)的重要成員。有研究證實(shí)，MBL多態(tài)性與多種疾病有相關(guān)性，本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn) MBL基因

2、多態(tài)性和綿羊支原體肺炎抗性間有一定的相關(guān)性。為了理清 MBL的含量高低與綿羊支原體感染的關(guān)系以及 MBL發(fā)揮免疫效果的機(jī)制。本研究從綿羊個(gè)體水平和細(xì)胞水平，探究 MBL抗綿羊肺炎支原體感染的機(jī)制，實(shí)驗(yàn)如下：
　?、叛逯胁煌?MBL濃度綿羊人工感染肺炎支原體后體內(nèi)相關(guān)免疫因子變化規(guī)律研究:將血清中不同 MBL濃度的綿羊分組，人工感染綿羊支原體（MO）后，檢測(cè)并分析 MBL與多種免疫因子表達(dá)的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同 MBL濃度的綿羊人

3、工感染后血清中 MBL濃度呈下降趨勢(shì)，隨著人工感染時(shí)間的延長(zhǎng)，發(fā)生免疫水平不同的變化，其中 MBL濃度較高的綿羊組其促炎因子 IL-2、IFN-γ濃度比較較高，抗炎因子 IL-4在人工感染后一天呈逐漸升高，此后開(kāi)始下降；MBL低濃度的綿羊組人工感染后 TNF-α濃度顯著升高，隨炎癥的舒緩，逐漸降低；人工感染后補(bǔ)體 C1升高，其 MBL濃度較低的綿羊組14d后升至最高，反映出該組綿羊病程更長(zhǎng)，轉(zhuǎn)歸更慢；補(bǔ)體 C3在人工感染后的表達(dá)先急劇升

4、高再降低，MBL濃度較低的綿羊組下降比較緩慢。綜合人工感染后各免疫因子的表達(dá)變化情況，可知較高濃度 MBL可以增加綿羊?qū)χгw肺炎的抗性。
　　⑵綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)改良與細(xì)胞鑒定:呼吸道黏膜上皮細(xì)胞是一種很難獲得的細(xì)胞，作為向外開(kāi)放的組織，很容易被許多種病原菌污染，培養(yǎng)難度較大，本研究以二型膠原酶加刮刷法消化氣管黏膜提取綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，并用免疫組化法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
　?、荕BL對(duì)感染

5、MO的體外培養(yǎng)綿羊粘膜上皮細(xì)胞的修復(fù)作用研究：先用PEG-6000從綿羊血清中粗提天然 MBL，然后再利用 Mannan-Aragarose親和層析對(duì)粗提的 MBL進(jìn)行純化，從而得到比較純的目的蛋白，分別于原代培養(yǎng)綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞接種 MO前后，加入純化的 MBL蛋白，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況并檢測(cè)感染前后免疫因子的變化。研究發(fā)現(xiàn)綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞感染支原體肺炎后ICAM-1基因和 IL-6基因表達(dá)升高，MBL基因表達(dá)降低，各組之間相互比

6、較無(wú)顯著性差異。在細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中各組中細(xì)胞的凋亡率也沒(méi)有顯著性差異。但在支原體對(duì)綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞死亡率的影響實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，感染前加入 MBL蛋白的組明顯比感染后加入 MBL蛋白的組細(xì)胞存活率高。一定濃度的 MBL對(duì)綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞對(duì)抗 MO的感染效果比人工感染后追加 MBL效果好。其可能原因是 MBL在 MO與綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞結(jié)合前起到保護(hù)作用，防止病原菌與細(xì)胞的結(jié)合；當(dāng) MO與綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞結(jié)合后追加的 MBL卻沒(méi)有較