MBL抗綿羊肺炎支原體感染過程中相關免疫因子的變化.pdf

1、綿羊支原體肺炎（Mycoplasmal pneumonia，MP），是動物傳染性疾病中影響較嚴重的疾病。近年來在新疆呈爆發(fā)性流行，給畜牧業(yè)帶來了一定的損失。甘露聚糖結合凝集素（Mannose- binding lectin，MBL）是肝臟合成分泌到血液中抗感染的天然免疫分子，它在抗原抗體產生特異性反應之前，能激活誘導機體免疫反應，被看成是天然免疫系統(tǒng)的重要成員。有研究證實，MBL多態(tài)性與多種疾病有相關性，本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn) MBL基因

2、多態(tài)性和綿羊支原體肺炎抗性間有一定的相關性。為了理清 MBL的含量高低與綿羊支原體感染的關系以及 MBL發(fā)揮免疫效果的機制。本研究從綿羊個體水平和細胞水平，探究 MBL抗綿羊肺炎支原體感染的機制，實驗如下：
　　⑴血清中不同 MBL濃度綿羊人工感染肺炎支原體后體內相關免疫因子變化規(guī)律研究:將血清中不同 MBL濃度的綿羊分組，人工感染綿羊支原體（MO）后，檢測并分析 MBL與多種免疫因子表達的變化。結果發(fā)現(xiàn)，不同 MBL濃度的綿羊人

3、工感染后血清中 MBL濃度呈下降趨勢，隨著人工感染時間的延長，發(fā)生免疫水平不同的變化，其中 MBL濃度較高的綿羊組其促炎因子 IL-2、IFN-γ濃度比較較高，抗炎因子 IL-4在人工感染后一天呈逐漸升高，此后開始下降；MBL低濃度的綿羊組人工感染后 TNF-α濃度顯著升高，隨炎癥的舒緩，逐漸降低；人工感染后補體 C1升高，其 MBL濃度較低的綿羊組14d后升至最高，反映出該組綿羊病程更長，轉歸更慢；補體 C3在人工感染后的表達先急劇升

4、高再降低，MBL濃度較低的綿羊組下降比較緩慢。綜合人工感染后各免疫因子的表達變化情況，可知較高濃度 MBL可以增加綿羊對支原體肺炎的抗性。
　?、凭d羊氣管黏膜上皮細胞原代培養(yǎng)改良與細胞鑒定:呼吸道黏膜上皮細胞是一種很難獲得的細胞，作為向外開放的組織，很容易被許多種病原菌污染，培養(yǎng)難度較大，本研究以二型膠原酶加刮刷法消化氣管黏膜提取綿羊氣管黏膜上皮細胞，對細胞進行形態(tài)學觀察，并用免疫組化法對細胞進行鑒定。
　?、荕BL對感染

5、MO的體外培養(yǎng)綿羊粘膜上皮細胞的修復作用研究：先用PEG-6000從綿羊血清中粗提天然 MBL，然后再利用 Mannan-Aragarose親和層析對粗提的 MBL進行純化，從而得到比較純的目的蛋白，分別于原代培養(yǎng)綿羊氣管黏膜上皮細胞接種 MO前后，加入純化的 MBL蛋白，觀察細胞生長狀況并檢測感染前后免疫因子的變化。研究發(fā)現(xiàn)綿羊氣管黏膜上皮細胞感染支原體肺炎后ICAM-1基因和 IL-6基因表達升高，MBL基因表達降低，各組之間相互比

6、較無顯著性差異。在細胞凋亡實驗中各組中細胞的凋亡率也沒有顯著性差異。但在支原體對綿羊氣管黏膜上皮細胞死亡率的影響實驗中發(fā)現(xiàn)，感染前加入 MBL蛋白的組明顯比感染后加入 MBL蛋白的組細胞存活率高。一定濃度的 MBL對綿羊氣管黏膜上皮細胞對抗 MO的感染效果比人工感染后追加 MBL效果好。其可能原因是 MBL在 MO與綿羊氣管黏膜上皮細胞結合前起到保護作用，防止病原菌與細胞的結合；當 MO與綿羊氣管黏膜上皮細胞結合后追加的 MBL卻沒有較