葎草黃酮類成分及藥理作用的研究.pdf

1、前言:葎草始載于《名醫(yī)別錄》,藥用歷史悠久,在民間廣泛應用。歷代本草如《唐本草》、《開寶本草》、《本草綱目》等均有記載。當代很多醫(yī)藥書籍亦有收錄。但國內外對葎草的化學成分、藥理作用等未見深入的研究報道。本試驗對葎草的化學成分進行了提取、分離和鑒定工作,得到葎草中主要的黃酮類成分為木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(LGL)、大波斯菊苷(AGL)和牡荊素(VIT)三種;對不同季節(jié)和不同部位葎草中LGL和AGL的含量進行了測定,為葎草的采收

2、季節(jié)和藥用部位提供了理論依據(jù);對葎草總黃酮(HSTF)和AGL在大鼠體內的藥代動力學參數(shù)進行了測定,為其制備成適當?shù)膭┬投鴳糜谂R床奠定了理論基礎;對HSTF、LGL和AGL的抑瘤作用進行了初步研究,發(fā)現(xiàn)LGL和HSTF對HepG2細胞有較強的抑制作用;通過小鼠肺水清除率試驗,發(fā)現(xiàn)HSTF、LGL和AGL三種成分均能促進肺泡上皮細胞鈉通道的開放而達到利水作用,為葎草利水消腫功效的現(xiàn)代臨床應用打下堅實的理論基礎。
　　 目的:通過

3、對葎草的研究,明確葎草中所含的黃酮類成分;明確葎草的最佳采集季節(jié)及藥用部位;明確葎草中HSTF和AGL在大鼠體內的藥代動力學特征;明確葎草中HSTF、LGL和AGL的相關藥理作用。為葎草的進一步開發(fā)和應用打下堅實理論基礎。
　　 方法:
　　 采用大孔吸附樹脂技術、硅膠柱層析技術及制備液相技術分離純化葎草的化學成分。
　　 采用高效液相色譜法對不同季節(jié)及不同部位葎草中LGL和AGL的含量進行測定。
　　

4、采用高效液相色譜法對HSTF和AGL在大鼠體內的藥代動力學參數(shù)進行測定。
　　 采用細胞培養(yǎng)和臺盼藍染色法探討了HSTF、LGL和AGL對HepG2細胞增殖的抑制作用。
　　 采用小鼠肺水清除率方法探討了HSTF、LGL和AGL的利水作用及其作用機制。
　　 結果:
　　 葎草化學成分分離鑒定結果通過紫外光譜,紅外光譜,核磁共振譜等確定所分離的4種有機單體成分分別為:LGL、AGL、VIT和尿嘧啶。同時,

5、初步確定一種硝酸鹽類無機物質為硝酸鉀。
　　 葎草化學成分含量測定結果通過高效液相色譜法測定可知:葎草中LGL和AGL含量在6～8月份較高。其中LGL含量在7月份最高,AGL含量在6月份最高。不同部位葎草中LGL和AGL含量由高到低依次為:葉＞莖＞葉柄＞根。
　　 葎草化學成分藥代動力學參數(shù)測定結果對SD大鼠單次靜脈給予葎草總黃酮(HSTF)注射液,于給藥后不同時間點測定血藥濃度。經藥代動力學軟件處理得到不同劑量LGL的

6、清除率(C1)從6.25～7.81L/h/kg,半衰期(t1/2)從1.43～2.43 h,表觀分布容積(Vc)從15.99～21.89 L/kg;AGL的清除率(C1)從10.44～15.84 L/h/kg,半衰期(t1/2)從1.56～3.97 h,表觀分布容積(Vc)從35.59～65.17 L/kg。對SD大鼠單次靜脈給予AGL注射液,于給藥后不同時間點測定血藥濃度。經藥代動力學軟件處理得到不同劑量AGL的清除率(C1)從11.

7、38～15.83 L/h/kg,半衰期(t1/2)從1.36～2.03 h,表觀分布容積(Vc)從26.01～44.95 L/kg。
　　 葎草化學成分抑瘤試驗結果采用細胞培養(yǎng)和臺盼藍染色法測定葎草化學成分的抑瘤作用,當HSTF、LGL和AGL的濃度由6.25～100μM時,HepG2細胞活度分別為91.2％～5.5％,71.2％～4.8％,96.4％～78.8％。
　　 葎草化學成分利水作用試驗結果肺水清除率試驗結果顯

8、示:5％BSA對照組AFC為29.8％;阿米洛利組AFC為20.8％(P＜0.05);特布他林組AFC為42.0％(P＜0.05);LGL組AFC為34.3％;LGL+阿米洛利組AFC為22.8％(P＜0.05);AGL組AFC為35.4％;AGL+阿米洛利組AFC為21.0％(P＜0.05);總黃酮組AFC為38.9％(P＜0.05);總黃酮+阿米洛利組AFC為26.7％(P＜0.05)。
　　 結論與討論:
　　 葎

9、草中所含有的黃酮類成分主要為LGL、AGL和VIT,其中VIT的含量較低。
　　 葎草以黃酮類成分為物質基礎的臨床應用中,采集季節(jié)應該在6～8月份,葎草葉應該是主要藥用部位。
　　 建立的高效液相色譜法測定葎草中化學成分藥代動力學參數(shù)的方法簡便易行,可以用于測定HSTF和AGL在大鼠體內的藥代動力學參數(shù)。HSTF和AGL適合制備成相關的劑型在臨床上應用。
　　 HepG2細胞活性抑制試驗結果顯示:HSTF和LGL

10、對HepG2細胞活性抑制作用明顯,并且呈劑量依賴關系,隨著藥物濃度的增加細胞活性降低。AGL對HepG2細胞活性的作用顯著低于LGL和HSTF。文獻報導黃酮類成分對于抗腫瘤細胞的增殖作用,其B環(huán)上C3,C4位上的兩個鄰位-OH對于抑制酶的活性是必需的。C2和C3之間的共軛雙鍵使B環(huán)和C環(huán)在同一平面,有利于接近激酶底物結合位點,這兩種結構對于黃酮類成分抗細胞增殖的活性至關重要,這與本試驗結果相吻合。同時也能夠解釋LGL和AGL兩個黃酮類化

11、合物雖然只相差了一個-OH,但其藥理作用卻相差懸殊的原因。
　　 肺水清除率(AFC)試驗結果顯示:阿米洛利作為上皮細胞鈉通道的阻斷劑,顯著降低正常組小鼠肺水清除率約30.2％。這說明阿米洛利對鈉通道的阻斷作用使肺泡對水份的吸收作用受到抑制。而特布他林作為鈉通道的開放劑,能夠增加正常組小鼠的肺水清除率約40.9％。說明特布他林具有促進鈉通道開放的作用,使肺泡上皮鈉通道對水的通透性增強。HSTF組、LGL組和AGL組的肺水清除率與