兩面針內(nèi)生活性菌株Y118的初步研究.pdf

1、目的:由于植物內(nèi)生真菌與宿主植物特殊的生存關(guān)系，使其能夠產(chǎn)生與宿主植物相同或形似的化學(xué)成分。本課題以廣西產(chǎn)兩面針Zanthoxylum nitidum(Rox.)DC.原植物分離出的活性內(nèi)生菌株Y118為研究對(duì)象，并對(duì)其次生代謝產(chǎn)物的生物活性進(jìn)行研究。旨在為藥用植物兩面針的資源保護(hù)與開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:通過(guò)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法對(duì)Y118菌株進(jìn)行鑒定;通過(guò)單因素考察來(lái)研究各條件對(duì)菌株發(fā)酵的影響;采用提取法獲得Y118菌株

2、次生代謝的粗提物，并通過(guò)抑菌圈法和3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT法)研究其抗菌抗腫瘤作用，同時(shí)利用硅膠柱色譜，大孔樹(shù)脂吸附色譜，葡聚糖凝膠色譜，重結(jié)晶等分離方法對(duì)其次生代謝的粗提物的活性部位進(jìn)行分離和純化，并通過(guò)質(zhì)譜，氫譜和碳譜等波譜技術(shù)解析化合物結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果:經(jīng)鑒定，菌株Y118可能為半知菌亞門(mén)擬莖點(diǎn)霉屬真菌;以發(fā)酵菌絲干重為考察對(duì)象，結(jié)果表明燕麥片為碳源，牛肉膏為氮源，PH=7，溫度25℃

3、、培養(yǎng)時(shí)間7天、接種量10塊/瓶、裝液量250ml/瓶、搖床轉(zhuǎn)速120r/min時(shí)，菌絲干重?cái)?shù)值最大。菌株發(fā)酵代謝產(chǎn)物的提取物和發(fā)酵液，均對(duì)病原菌有不同的抑制作用，其中以發(fā)酵液的抑菌作用最明顯且廣譜。當(dāng)濃度為80ug/ml時(shí)，Y118菌株的發(fā)酵代謝產(chǎn)物的甲醇提取物，丙酮提取物和乙酸乙酯提取物均對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞有抑制作用;菌株的發(fā)酵液對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞具明顯的抑制作用。從菌株發(fā)酵代謝產(chǎn)物的提取物的活性部位和發(fā)酵液中分離出15個(gè)單體化