關于SLC5A8基因和p53基因在結直腸癌組織中表達的臨床研究.pdf

1、背景：結直腸癌是人類消化道最常見的惡性腫瘤之一，它的發(fā)病率居于世界第3位，僅次于肺癌和胃癌。目前在全球范圍內，結直腸癌每年新增人數(shù)約100萬，死亡人數(shù)約50萬，約占所有癌癥新發(fā)病例的10％-15%。其早期癥狀不典型，約50%的患者在就診時已經是晚期或已發(fā)生了轉移。由于環(huán)境污染、遺傳表達以及不良的生活習慣等多種因素的影響，結直腸癌的發(fā)病率越來越高?，F(xiàn)在人們認為結直腸癌的發(fā)生是由多基因、多步驟參與的復雜過程，涉及到某些癌基因的激活和抑癌基因

2、的失活。在正常情況下，結直腸粘膜上皮細胞的增殖和凋亡之間保持著動態(tài)平衡，一旦打破該平衡，就會發(fā)生一系列的病理改變。目前結直腸癌的診斷主要依靠內鏡、病理、鋇劑灌腸檢查、超聲、CT、血清腫瘤標志物等方法。隨著分子生物學的發(fā)展，人們對結直腸癌發(fā)病的機理有了更深入的了解，很多研究者檢測到結直腸癌組織中某些抑癌基因表達水平發(fā)生了變化，提示其與結直腸癌的發(fā)生存在一定關系。溶質載體家族5成員8（solute carrier family5 membe

3、r8，SLC5A8）是近年發(fā)現(xiàn)的一個新的候選抑癌基因，P53基因是目前研究的比較深入和廣泛的抑癌基因，它們與結直腸癌的發(fā)生、發(fā)展都存在一定關系。
　　SLC5A8基因是2002年Rodriguez等發(fā)現(xiàn)，并且從人腎cDNA文庫中克隆鑒定的編碼610個氨基酸蛋白的序列，認為是SLC5家族的第8個成員，被命名為SLC5A8。SLC5A8基因位于人類染色體的12q13-23，編碼蛋白屬于鈉離子/葡萄糖共轉運蛋白家族成員，是鈉離子耦聯(lián)的轉

4、運短鏈脂肪酸、乳酸、煙酸和碘化物的載體。SLC5A8編碼蛋白在腸道中分布于末端回腸和整段大腸的刷狀緣膜，并在末端結腸和直腸高表達。SLC5A8基因在人類的許多腫瘤中如甲狀腺癌、食管癌、胃癌、肺癌、腦膠質瘤等中表達降低或缺失，目前，國內外學者研究認為SLC5A8基因表達下降的機制主要是SLC5A8基因外顯子1的GPG島的甲基化及組蛋白去乙酰化。SLC5A8表達的轉運體的所有底物中，丁酸、丙酸和丙酮酸的功能是作為組蛋白脫乙?；敢种苿鼈?/p>

5、可以介導多種腫瘤細胞的凋亡，可能是其抑制腫瘤的機制。尤其是丁酸，它是細菌的發(fā)酵產物，它可以促進正常結腸上皮細胞的變異，通過上調促凋亡基因和下調抗增殖基因而導致細胞凋亡。所以SLC5A8基因的失活可能成為結直腸癌發(fā)生的原因之一。
　　p53基因在1979年由Lane等首次報道，是目前研究的比較深入的基因之一，它位于人類17號染色體的短臂，包含有11個外顯子和10個內含子，編碼一個包含393個氨基酸的蛋白質。對它的認識人們經歷了腫瘤抗

6、原、癌基因、抑癌基因三個階段。p53基因有野生型和突變型兩種，野生型p53是抑癌基因，它參與細胞周期的調控，對抑制腫瘤的增殖有重要作用，當野生型p53轉變?yōu)橥蛔冃蚿53后，則失去了對細胞生長的抑制作用，進而導致了腫瘤的發(fā)生。目前研究發(fā)現(xiàn)p53基因與大約50%的腫瘤有密切關系，幾乎所有的腫瘤都有p53基因的突變。
　　目的：探討SLC5A8基因和p53基因在結直腸癌組織中的表達。
　　方法：采用（1）實時熒光定量PCR（RT-

7、qPCR）檢測SLC5A8基因mRNA和p53基因mRNA在30例結直腸癌患者的癌組織和癌旁組織中的水平；（2）HE染色檢測收集的結直腸癌患者的癌組織和癌旁組織的腺管及細胞的形態(tài)；（3）免疫組化檢測SLC5A8基因蛋白和p53基因蛋白在結直腸癌患者的癌組織和癌旁組織的表達情況。應用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析，符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（ x±s）表示，不符合正態(tài)分布的以平均秩次表示，SLC5A8基因mRNA水平兩組間和p

8、53基因mRNA水平兩組間的比較符合正態(tài)分布的采用t檢驗，不符合正態(tài)分布的兩組間比較采用Mann-Whitney u秩和檢驗，多組間采用K-ruskal-walls H秩和檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：實時熒光定量PCR檢測到（1）30例結直腸癌患者中22例患者癌組織中SLC5A8基因mRNA水平低于癌旁組織；3例患者癌組織和癌旁組織重SLC5A8基因均不表達；5例患者癌組織中SLC5A8基因mRNA水平高于

9、癌旁組織。SLC5A8基因mRNA水平在癌組織和癌旁組織的差異與患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤分期、淋巴結轉移均沒有統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。（2）30例結直腸癌患者中13例患者癌組織中p53基因mRNA水平低于癌旁組織；17例患者癌組織中p53基因mRNA水平高于癌旁組織，p53基因mRNA水平在癌組織和癌旁組織的差異與患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤分期沒有明顯統(tǒng)計學意義（p＞0.05），與淋巴結轉移有統(tǒng)計學意義（p＜0.05）

10、。免疫組化技術檢測到（1）SLC5A8基因蛋白表達主要位于結直腸組織細胞的胞質，癌旁組織細胞的胞質有少量表達，而癌組織細胞的胞質未見明確表達。（2）p53基因蛋白表達主要位于結直腸組織細胞的胞核，在癌組織細胞的胞核有一定的表達，而癌旁組織細胞的胞核幾乎未見表達。
　　結論：（1）SLC5A8基因在結直腸癌組織中表達明顯下降，提示其表達水平與結直腸癌的發(fā)生可能存在一定關系；
　?。?）p53基因在結直腸癌組織中表達升高，提示其