大鼠酒精性脂肪性肝病的實(shí)驗(yàn)性研究及硫普羅寧的干預(yù)治療性作用.pdf

1、[目的]：通過復(fù)制大鼠酒精性脂肪性肝病模型，觀察酒精性肝病發(fā)病過程中病理及超微結(jié)構(gòu)變化，檢測蛋白酶體LMP7亞基的基因表達(dá)和蛋白含量以及肝損傷指標(biāo)和氧化抗氧化指標(biāo)在這一過程中的變化，并給予抗氧化藥物硫普羅寧對酒精性肝病進(jìn)行干預(yù)治療，以進(jìn)一步探討酒精性肝病的發(fā)病機(jī)制并為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 [方法]：成年雄性Wistar大鼠100只，體重(180±10)g，正常喂養(yǎng)一周后隨機(jī)分為兩組，酒精性肝病模型組和橄欖油飲食對照組，前一組8

2、0只，后一組20只。酒精性肝病模型組采用酒精灌胃加橄欖油飲食復(fù)制動物模型，同時(shí)給予維生素復(fù)合物及必需礦物質(zhì)(蛋白質(zhì)提供熱量占總熱卡的18％，脂肪為14％，碳水化合物為12％，酒精為46％)。以乙醇溶液灌胃，酒精用量分別為30[％]，4g·Kg<'-1>·d<'-1>；40％，5g·Kg<'-1>·d<'-1>； 50％，6g·Kg<'-1>·d<'-1>，四周為一階段，每日2次灌胃至12周末，誘導(dǎo)產(chǎn)生酒精性肝病模型。然后模型組隨機(jī)平均

3、分為三組，兩個(gè)灌酒組均給予60％酒精9g·Kg<'-1>·d<'-1>，另外分別給予硫普羅寧300mg·Kg<'-1>·d<'-1>和等量生理鹽水灌胃，每天2次，即硫普羅寧加酒精灌胃(干預(yù)治療組)和生理鹽水加酒精灌胃(未治療組)，另一組停止灌酒，給予等量生理鹽水灌胃(鹽水組)，共4周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后斷頭處死大鼠，取血清測定肝功、生化、MDA、巰基；測定體重、肝重，計(jì)算肝/體比，即肝指數(shù)：肝組織勻漿測定MDA、總巰基及分型巰基的含量；熒光定量

4、PCR及Western雜交測定蛋白酶體LMP7亞基的表達(dá)；光鏡和電鏡下觀察肝臟組織結(jié)構(gòu)變化。 [結(jié)果]：酒精性肝病大鼠模型在造模三個(gè)月后出現(xiàn)廣泛的細(xì)胞內(nèi)小泡性脂肪變性，部分大鼠出現(xiàn)了細(xì)胞內(nèi)大泡性脂肪變，四個(gè)月表現(xiàn)為酒精性肝炎。電鏡表現(xiàn)的嚴(yán)重程度和病理一致，即隨著肝組織病理變化的加重電鏡下的改變也呈加重趨勢，模型組線粒體形態(tài)基本正常，基質(zhì)電子密度降低；未治療組可見線粒體膜斷裂，嵴斷裂或消失，基質(zhì)密度增高，形態(tài)各異，可見U型線粒體或

5、巨大線粒體；干預(yù)治療組可見脂滴較模型組減少，線粒體形態(tài)基本正常；鹽水組病變明顯減輕，很少見線粒體膜破裂的現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)酒精性肝病中存在兩種脂滴，以膽固醇脂滴為主；另外不同程度酒精性肝病組中均存在代謝異常，糖代謝異常常見，另有代謝產(chǎn)物髓樣小體、自噬體以及細(xì)胞核內(nèi)存在脂滴和內(nèi)噬體。三個(gè)月大鼠血清生化指標(biāo)ALT,AST，ALP等明顯升高，血清和肝組織MDA含量增加，巰基含量下降(P

6、和蛋白含量下降(P<0.05)；干預(yù)治療組和未治療組各項(xiàng)指標(biāo)均繼續(xù)惡化(和模型組相比P<0.01)，但以未治療組改變更加嚴(yán)重(和干預(yù)治療組相比P<0.01)；鹽水組各項(xiàng)指標(biāo)明顯改善(和模型組相比P<0.05)。 [結(jié)論]：1．本實(shí)驗(yàn)成功復(fù)制了大鼠酒精性脂肪性肝病模型。灌酒3個(gè)月后形成酒精性脂肪肝模型，4個(gè)月建立了酒精性肝炎模型。2．蛋白酶體IMP7亞基含量下降且與酒精性肝病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。推測蛋白酶體LMP7亞基含量的降低可