GLUT-1在胰腺癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Glucose transporters，GLUTs）是細(xì)胞攝取葡萄糖的主要載體，目前已知的八種葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白中以葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1（GLUT-1）分布最廣，研究最多。目前研究發(fā)現(xiàn)GLUT-1在多種腫瘤中存在異常高表達(dá)，與惡性腫瘤細(xì)胞異常增殖密切相關(guān)，被認(rèn)為是一個腫瘤增殖相關(guān)基因。本實(shí)驗旨在探討GLUT-1在胰腺癌組織標(biāo)本中的表達(dá)及臨床意義，研究GLUT-1在胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)及對胰腺癌細(xì)胞增殖的影響。
　

2、　方法：⑴利用免疫組織化學(xué)法（IHC）檢測GLUT-1在53對胰腺癌組織和相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)，并分析 GLUT-1的表達(dá)與臨床病理因素及胰腺癌患者生存預(yù)后的關(guān)系；⑵正電子發(fā)射計算機(jī)斷層顯像（PET-CT）檢測胰腺癌患者18F-脫氧葡萄糖（18F-FDG）的攝取值，免疫組化檢測Ki-67在胰腺癌組織及癌旁組織中的表達(dá)水平，分析GLUT-1的表達(dá)與18F-FDG攝取值及Ki-67表達(dá)之間的相關(guān)性；⑶利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)（RT-PCR）和

3、Western blot檢測GLUT-1在胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1、Patu-8988、BxPC3、SW1990中的表達(dá)情況，將siRNA-GLUT-1轉(zhuǎn)染到胰腺癌細(xì)胞株中，并對轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞株進(jìn)行嘌呤霉素陽性篩選，利用RT-PCR和Western blot確認(rèn)RNAi靶向沉默GLUT-1的效果；⑷沉默GLUT-1表達(dá)后，利用體外增殖實(shí)驗（CCK-8法）、18F-FDG結(jié)合率檢測，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期檢測，研究GLUT-1與胰腺癌細(xì)胞體外生

4、長增殖的關(guān)系。
　　結(jié)果：①GLUT-1在胰腺癌組織中的陽性率明顯高于癌旁組織，兩者陽性表達(dá)率分別為73.6％和20.6%（P<0.05）；GLUT-1的表達(dá)與臨床病理因素的分析結(jié)果顯示，GLUT-1的表達(dá)與腫瘤大小、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P<0.05），而與性別、年齡、腫瘤部位、分化程度、血管侵犯無明顯相關(guān)(P>0.05)，胰腺癌患者生存期多因素分析顯示GLUT-1是胰腺癌患者生存期的獨(dú)立危險因素之一。②GLUT-1陽性

5、胰腺癌患者檢測SUVmax值中位數(shù)值為5.19，25%-75%范圍：4.97-8.18，GLUT-1陰性胰腺癌患者檢測 SUVmax值中位數(shù)值為2.95，25%-75%范圍：2.43-3.97（P<0.05）；Spearman分析表明SUVmax值與GLUT-1表達(dá)呈正相關(guān)性（r=0.6885，P<0.001）。③RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示，GLUT-1在細(xì)胞株P(guān)ANC-1、Patu8988、SW1990、BxP

6、C3中都高表達(dá)，通過 Western blot檢測四株胰腺癌細(xì)胞 PANC-1、Patu8988、SW1990、BxPC3中 GLUT-1/β-actin的蛋白相對灰度比值分別為0.894±0.013、0.851±0.029、0.812±0.035、0.785±0.041，RNAi技術(shù)沉默GLUT-1在PANC-1和Patu8988中的表達(dá)，蛋白抑制率分別為84.6%、87.7%。④沉默GLUT-1在PANC-1和Patu8988中的表

7、達(dá)后，PANC-1和Patu8988細(xì)胞18F-FDG攝取值明顯降低(P<0.05 P<0.05)，增殖能力明顯降低（P<0.05，P<0.05），細(xì)胞凋亡增加( P<0.05 P<0.05)，細(xì)胞周期檢測結(jié)果顯示PANC-1細(xì)胞和Patu8988細(xì)胞的G0/G1期細(xì)胞數(shù)均明顯增多（P<0.05, P<0.05），PANC-1細(xì)胞中G2/M期細(xì)胞數(shù)減少（P<0.05），而Patu8988細(xì)胞中S期細(xì)胞數(shù)減少（P<0.05）。