解耦聯蛋白2在非酒精性脂肪性肝病過氧化損傷中的作用探討.pdf

1、目的:通過觀察京尼平、維生素E兩者單獨及聯合應用對非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)體外細胞模型中解耦聯蛋白2(LJCP2)的基因和蛋白水平表達、細胞線粒體膜電位變化和相關因子的水平變化,探討LJCP2在NAFLD過氧化損傷中的作用,以及京尼平和維生素E對NAFLD的干預作用和可能機制。
　　 方法:常規(guī)培養(yǎng)人永生化正常胎肝LO2細胞株,貼壁后分為5組:對照組常規(guī)培養(yǎng)72 h；模型組采用軟脂酸誘導LO2細胞72 h,建立非酒精性脂

2、肪性肝病體外模型；干預組A在建模同時給予維生素E(VitE)干預72 h；干預組B在建模同時給予京尼平干預72 h；干預組C在建模同時給予兩者合用干預作用72小時。油紅O染色光學顯微鏡觀察LO2細胞脂變情況；檢測細胞培養(yǎng)液中丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、γ-谷氨酰轉移酶(GGT)、甘油三酯(TG)水平,丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧酶(SOD)活力；羅丹明123單染法觀察線粒體膜電位變化；RT-PCR檢測

3、各組細胞UCP2、NF-κB和TNF-a的mRNA表達情況；Western blot檢測UCP2、NF-κB和TNF-a蛋白水平表達。
　　 結果:
　　 1.成功誘導LO2細胞脂肪變性,建立非酒精性脂肪性肝病體外模型。
　　 2.與對照組比較,模型組LO2細胞脂肪變性顯著；細胞上清ALT、AST、GGT、TG水平和MDA含量升高,SOD活力降低；線粒體膜電位降低；UCP2、NF-κB和TNF-a在基因和蛋白水平

4、的表達均增高。
　　 3.與模型組比較,干預組A、B、C LO2細胞脂肪變性面積減小、程度減輕；細胞上清ALT、AST、GGT、TG水平和MDA含量降低,SOD活力升高；線粒體膜電位增高；UCP2、NF-κB和TNF-a在基因和蛋白水平的表達有不同程度降低。尤以干預組C為最。
　　 結論:
　　 1.UCP2的高表達與NAFLD的過氧化損傷有關。
　　 2.NF-κB和TNF-a參與了NAFLD的發(fā)生。<