UPF1在非酒精性脂肪性肝病中的作用研究.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)患病率逐年增高，已成為最常見的慢性肝病之一，NAFLD的發(fā)生發(fā)展機制目前尚未完全明確。UPF1是無意義編碼的mRNA降解（nonsense-mediated mRNA decay，NMD）中的關(guān)鍵蛋白，已有研究表明UPF1在細胞DNA復制及修復中起重要作用，NMD及DNA的損傷與肝內(nèi)脂質(zhì)代謝及肝細胞損傷相關(guān)，但UPF1在NAFLD發(fā)病機制中

2、起的作用尚不明確。
　　目的:本研究通過對L02細胞及小鼠模型的實驗，探討UPF1在NAFLD發(fā)病機制中起的作用。
　　方法:1.通過給C57BL/6小鼠MCD飲食5周建立NAFLD模型小鼠。將肝臟L02細胞置于軟脂酸、油酸（兩者1∶2混合）的高脂環(huán)境中培養(yǎng)出NAFLD肝細胞。然后用油紅染色法觀測細胞內(nèi)脂滴，收集細胞凍液，測定其中TG含量，評估建模情況。
　　2.從小鼠肝臟組織中及FFA誘導的L02細胞中提取RNA，進

3、行逆轉(zhuǎn)錄，對合成的UPF1引物進行實時熒光定量PCR，運用Western Blot方法檢查UPF1蛋白的變化，比較正常小鼠肝細胞和NAFLD小鼠、正常L02細胞和脂變的L02細胞內(nèi)UPF1及蛋白的變化。
　　3.運用siRNA干擾的方法抑制NAFLD細胞模型中UPF1的表達，檢測其脂肪變性程度，并進一步檢測UPF1表達抑制后脂肪酸β氧化基因(PGC1α，PPARα，CPT1α)、ROS等指標的變化，探討UPF1在非酒精性脂肪性肝病

4、的發(fā)病中的作用。
　　結(jié)果:1.FFA處理L02細胞后，UPF1 mRNA及UPF1蛋白表達下降;MCD飲食處理后模型小鼠UPF1 mRNA及UPF1蛋白表達下降。
　　2.抑制L02細胞UPF1表達后，UPF1 mRNA表達顯著下降，細胞內(nèi)甘油三酯含量明顯增加。
　　3.抑制L02細胞UPF1表達后，PGC1αmRNA，PPARα mRNA，CPT1α mRNA表達均下降。
　　4.抑制L02細胞UPF1表達后