UPF1在非酒精性脂肪性肝病中的作用研究.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)患病率逐年增高，已成為最常見(jiàn)的慢性肝病之一，NAFLD的發(fā)生發(fā)展機(jī)制目前尚未完全明確。UPF1是無(wú)意義編碼的mRNA降解（nonsense-mediated mRNA decay，NMD）中的關(guān)鍵蛋白，已有研究表明UPF1在細(xì)胞DNA復(fù)制及修復(fù)中起重要作用，NMD及DNA的損傷與肝內(nèi)脂質(zhì)代謝及肝細(xì)胞損傷相關(guān)，但UPF1在NAFLD發(fā)病機(jī)制中

2、起的作用尚不明確。
　　目的:本研究通過(guò)對(duì)L02細(xì)胞及小鼠模型的實(shí)驗(yàn)，探討UPF1在NAFLD發(fā)病機(jī)制中起的作用。
　　方法:1.通過(guò)給C57BL/6小鼠MCD飲食5周建立NAFLD模型小鼠。將肝臟L02細(xì)胞置于軟脂酸、油酸（兩者1∶2混合）的高脂環(huán)境中培養(yǎng)出NAFLD肝細(xì)胞。然后用油紅染色法觀測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂滴，收集細(xì)胞凍液，測(cè)定其中TG含量，評(píng)估建模情況。
　　2.從小鼠肝臟組織中及FFA誘導(dǎo)的L02細(xì)胞中提取RNA，進(jìn)

3、行逆轉(zhuǎn)錄，對(duì)合成的UPF1引物進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，運(yùn)用Western Blot方法檢查UPF1蛋白的變化，比較正常小鼠肝細(xì)胞和NAFLD小鼠、正常L02細(xì)胞和脂變的L02細(xì)胞內(nèi)UPF1及蛋白的變化。
　　3.運(yùn)用siRNA干擾的方法抑制NAFLD細(xì)胞模型中UPF1的表達(dá)，檢測(cè)其脂肪變性程度，并進(jìn)一步檢測(cè)UPF1表達(dá)抑制后脂肪酸β氧化基因(PGC1α，PPARα，CPT1α)、ROS等指標(biāo)的變化，探討UPF1在非酒精性脂肪性肝病

4、的發(fā)病中的作用。
　　結(jié)果:1.FFA處理L02細(xì)胞后，UPF1 mRNA及UPF1蛋白表達(dá)下降;MCD飲食處理后模型小鼠UPF1 mRNA及UPF1蛋白表達(dá)下降。
　　2.抑制L02細(xì)胞UPF1表達(dá)后，UPF1 mRNA表達(dá)顯著下降，細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量明顯增加。
　　3.抑制L02細(xì)胞UPF1表達(dá)后，PGC1αmRNA，PPARα mRNA，CPT1α mRNA表達(dá)均下降。
　　4.抑制L02細(xì)胞UPF1表達(dá)后