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文檔簡介
1、目的:探討腸源性內(nèi)毒素血癥(intestinal endotoxemia,IETM)與胰島素抵抗(insulinresistance,IR)之間的關(guān)系,研究IETM在非酒精性脂肪肝性肝病(nonalcoholic fattyliver disease.NAFLD)發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法:實(shí)驗(yàn)1.Wistar大鼠32只,雌雄各半,按隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì),分配雌雄兩個(gè)區(qū)組的大鼠為4組:正常對(duì)照組(normal control;NC)以正常
2、飼料喂養(yǎng),不飽和脂肪酸組(unsaturated fatty acid;NSFA)以不飽和脂肪酸飼料喂養(yǎng),飽和脂肪酸組(saturatedfatty acid;SFA)以飽和脂肪酸飼料喂養(yǎng),高糖高脂組(high sucrose and high-fat dict:HSF)以高蔗糖高飽和脂肪酸飼料喂養(yǎng),每組8只,雌雄各半,分籠飼養(yǎng),造模9周形成NAFLD模型。肝臟蘇木素-伊紅(HE)、sudanⅣ染色觀察肝脂變,透射電鏡下觀察肝臟細(xì)胞及細(xì)
3、胞外基質(zhì)的超微結(jié)構(gòu)變化。測定空腹血糖(FPG)、空腹血胰島素(FINS)含量,外周血漿游離脂肪酸(FFA),肝勻漿甘油三酯(TG),外周血漿及肝組織勻漿腫瘤壞死因子-α(TNF-α),計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(IRI,HOMA-IR及胰島素敏感指數(shù)(ISI)。實(shí)驗(yàn)2.動(dòng)物和分組同實(shí)驗(yàn)1,測定外周血漿內(nèi)毒素(LPS)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT),血漿及肝組織勻漿丙二醛(MDA)含量。免疫組化法測肝臟和腹部脂肪組織TNF-α,檢測各組動(dòng)物肝臟和腹
4、部脂肪組織免疫組化TNF-α的表達(dá)。 結(jié)果:1.NAFLD大鼠模型建立情況: 肝臟HE、sudanIV染色結(jié)果證實(shí):造模九周后,NSFA大鼠為單純性脂肪肝,SFA、HSF大鼠為脂肪性肝炎。電鏡下觀察肝臟線粒體腫脹變形,嵴排列紊亂,甚至斷裂消失,說明存在肝損傷。 2.血漿FFA、FINS、肝勻漿TG、血漿及肝勻漿TNF-α測定及IRI、ISI計(jì)算結(jié)果:三個(gè)模型組各指標(biāo)與NC組比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;外周血漿FFA:NSF
5、A高于SFA,HSF高于SFA,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;肝勻漿TG:SFA組顯著高于NSFA組,HSF組顯著高于SFA組,有統(tǒng)計(jì)差異;FINS、IRI:SEA組高于NSFA組,HSF組高于SFA組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;ISI:SFA組低于NSFA組,HSF組低于SFA組,但無統(tǒng)計(jì)差異;血漿及肝勻漿TNF-α:SFA組高于NSFA組,無統(tǒng)計(jì)差異,HSF組顯著高于SFA組,有統(tǒng)計(jì)差異。 3.外周血漿LPS、ALT、血漿及肝勻漿MDA測定結(jié)果:
6、 除NSFA組血漿ALT與NC組比無統(tǒng)計(jì)差異外,其他各組指標(biāo)均有統(tǒng)計(jì)差異;血漿ALT、LPS、肝勻漿MDA:SFA組顯著高于NSFA組,HSF組顯著高于SFA組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;血漿MDA:SFA組高于NSFA組,HSF組高于SFA組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4.肝組織及脂肪組織免疫組化TNF-α蛋白表達(dá)結(jié)果: 肝組織TNF-α:NSFA組與NC組比雖有增高,但無統(tǒng)計(jì)差異;SFA組、HSF組在統(tǒng)計(jì)學(xué)上均顯著高于NC組;SF
7、A組顯著高于NSFA組,HSF組顯著高于SFA組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 脂肪組織TNF-α:NSFA組、SFA組、HSF組均顯著高于NC組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;SFA組高于NSFA組,HSF組高于SFA組,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 5.電鏡結(jié)果: 三個(gè)模型組肝細(xì)胞線粒體均有不同程度的腫脹、變形、嵴斷裂消失等,SFA較NSFA嚴(yán)重,HSF較飽和組嚴(yán)重。 6.相關(guān)分析結(jié)果: (1)IR與體重、血漿FFA、血漿及肝勻漿。
8、TNF-α間存在正相關(guān)。 (2)LPS與體重、血漿ALT、FFA、血漿及肝勻漿TNF-α、MDA、肝組織及脂肪組織TNF-α蛋白間存在正相關(guān)。 1.肝脂肪變、脂肪性肝炎大鼠發(fā)生了胰島素抵抗,F(xiàn)FA、TNF-α與胰島素抵抗形成有關(guān)。 2.肝脂肪變、脂肪性肝炎大鼠發(fā)生了內(nèi)毒素血癥,內(nèi)毒素血癥與胰島素抵抗相關(guān),LPS可能通過FFA、TNF-α啟動(dòng)IR,導(dǎo)致肝損傷。 由此可以認(rèn)為:腸源性內(nèi)毒素通過促進(jìn)TNF-α的
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