激光顯微切割從組織切片中提取單個細(xì)胞進行PCR的方法探討.pdf

1、【目的】探討應(yīng)用激光捕獲顯微切割從石蠟切片和冰凍切片中進行單個細(xì)胞分離和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)在方法學(xué)上的可行性，為進一步將該技術(shù)用于霍奇金淋巴瘤的深入研究奠定基礎(chǔ)?！痉椒ā坎捎眉す獠东@顯微切割對46例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生石蠟組織和2例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生冰凍組織，進行單個細(xì)胞分離和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)。采用蛋白酶K消化提取DNA，選取β-珠蛋白基因引物進行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)及EB染色技術(shù)，采用凝膠成像圖像分析系統(tǒng)進行分析。首先對從1

2、00個淋巴細(xì)胞提取的DNA進行擴增，出現(xiàn)陽性結(jié)果后再逐次遞減，最后對單細(xì)胞提取的DNA進行擴增，并對結(jié)果進行綜合分析。統(tǒng)計學(xué)方法：各組間差異采用X2檢驗，P＜0.05表示差異有顯著性?！窘Y(jié)論】證實了應(yīng)用激光捕獲顯微切割從組織切片上進行單個細(xì)胞分離和PCR在方法學(xué)上的可行性，說明從組織切片中進行單細(xì)胞分離和PCR具有較好的擴增效率和特異性。組織切片上提取單個細(xì)胞的PCR擴增效率，冰凍組織明顯優(yōu)于石蠟包埋組織；細(xì)胞大小和切片厚度是影響擴增效