益氣養(yǎng)陰解毒方對小鼠Lewis肺癌細(xì)胞增殖及凋亡影響的研究.pdf

1、目的:1、觀察益氣養(yǎng)陰解毒方含藥血清對Lewis肺癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響;2、觀察益氣養(yǎng)陰解毒方對Lewis肺癌移植瘤生長及對移植瘤細(xì)胞凋亡的影響;3檢測益氣養(yǎng)陰解毒方對凋亡相關(guān)蛋白Caspae-3表達(dá)的影響,初步探討益氣養(yǎng)陰解毒方抗腫瘤作用機(jī)制。
　　方法:1、采用血清藥理學(xué)方法,用SD大鼠制備益氣養(yǎng)陰解毒方低、中、高劑量、順鉑(DDP)、益氣養(yǎng)陰解毒方聯(lián)合DDP、生理鹽水(NS)對照含藥血清,體外培養(yǎng)Lewis肺癌細(xì)胞(LLC

2、),采用MTT法檢測各組血清對LLC增殖的影響;2、制作C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,將接種LLC的C57BL/6小鼠隨機(jī)分為6組:NS對照組,益氣養(yǎng)陰解毒方低劑量組、中劑量組、高劑量組,順鉑(DDP)組,益氣養(yǎng)陰解毒方聯(lián)合DDP組,每組10只,接種第七天開始給藥,中藥及NS連續(xù)灌胃20d,DDP隔日腹腔注射,觀察移植瘤生長情況,接種后第28d處死動(dòng)物,稱各組瘤重,計(jì)算抑瘤率;3、流式細(xì)胞儀(FCM)AnnexinV-FI

3、TC/PI標(biāo)記法檢測各組體外培養(yǎng)細(xì)胞凋亡率,免疫組織化學(xué)法(SP法)檢測體外培養(yǎng)細(xì)胞Caspase-3表達(dá);4、TUNEL法檢測移植瘤細(xì)胞凋亡指數(shù),免疫組織化學(xué)法檢測移植瘤細(xì)胞Caspase-3表達(dá)。
　　結(jié)果:1、益氣養(yǎng)陰解毒方含藥血清能夠抑制體外培養(yǎng)LLC生長,且呈濃度和時(shí)間依賴性,高濃度作用72h抑制率達(dá)50％,中藥聯(lián)合DDP抑制率最高達(dá)94.67%;與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);2、益氣養(yǎng)陰解毒方低、中、高

4、劑量組對LLC移植瘤均有較明顯抑制作用,抑瘤率分別為19.30%、32.83%、34.59%,瘤重低于對照組,有顯著性差異(P<0.01),中藥聯(lián)合DDP組抑瘤率達(dá)83.71%,與其他各組比較,有顯著性差異(P<0.01);3、各組含藥血清均具有促進(jìn)LLC凋亡的作用,并呈劑量和時(shí)間依賴關(guān)系,中藥聯(lián)合DDP作用最強(qiáng),作用72h,細(xì)胞凋亡率下降,而壞死率升高,益氣養(yǎng)陰解毒方各劑量組含藥血清使Caspase-3的表達(dá)升高,呈劑量和時(shí)間依賴性,

5、與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與其他各組比較,中藥聯(lián)合DDP作用最強(qiáng)(P<0.05);4、TUNEL法檢測各中藥組及聯(lián)合組移植瘤細(xì)胞凋亡指數(shù)較對照組明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),各中藥組促進(jìn)移植瘤細(xì)胞Caspase-3表達(dá),隨劑量增加,表達(dá)增強(qiáng),與對照組比較有差異性(P<0.05),中藥聯(lián)合DDP組表達(dá)最強(qiáng),與其他各組比較有顯著性差異(P<0.01)。
　　結(jié)論:1、益氣養(yǎng)陰解毒方在體內(nèi)外試驗(yàn)中均可抑