ABL-N對Lewis肺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及機(jī)制研究.pdf

1、肺癌是2008年全球男性診斷率和死亡率最高的癌癥,女性肺癌的診斷率和死亡率分別占第四位和第二位。2008年全年總診斷率13％(160萬),總死亡率18％(140萬),對人類健康造成嚴(yán)重威脅。盡管手術(shù)治療和化學(xué)治療技術(shù)不斷發(fā)展,但肺癌患者生存率卻沒有明顯改變。中草藥在臨床研究中對一些腫瘤的預(yù)防和治療作用,已經(jīng)引起足夠重視。
　　 從中藥中提取分離得到的抗腫瘤成分,包括紫杉醇、喜樹堿和長春堿類等,已成為臨床治療腫瘤的常用藥物。研究發(fā)

2、現(xiàn),從菊科旋覆花屬植物歐亞旋覆花(Inula britannica.L.)中提取的倍半萜內(nèi)酯1-O-乙酰基大花旋覆花內(nèi)酯(1-O-acetylbritannilactone,ABL)有抗腫瘤作用。本文所用為ABL的衍生物5-(5-(ethylperoxy)pentan-2-yl)-6-methyl-3-methylene-2-oxo-2,3,3a,4,7,7a-hexahydrobenzofuran-4-y12-(6-methoxyna

3、phthalen-2-yl)propanoate(ABL-N)。
　　 目的:觀察ABL-N對Lewis肺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響,初步研究其作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 1不同終濃度ABL-N培養(yǎng)Lewis肺癌細(xì)胞12、24和48 h,MTT比色法檢測細(xì)胞增殖抑制率和計算IC50值。
　　 2 ABL-N干預(yù)后Lewis肺癌細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化
　　 (1)倒置顯微鏡觀察對照組細(xì)胞和10μg/m

4、L ABL-N處理組細(xì)胞培養(yǎng)48 h后的生長情況。
　　 (2)Hoechst33258熒光染色:熒光顯微鏡觀察對照組細(xì)胞和10μg/mLABL-N處理組細(xì)胞培養(yǎng)48 h后細(xì)胞核的變化。
　　 3 DNA裂解片段凝膠電泳:不同終濃度ABL-N處理組Lewis肺癌細(xì)胞培養(yǎng)24、48和72 h后,抽提細(xì)胞DNA,進(jìn)行DNA裂解片段凝膠電泳。
　　 4流式細(xì)胞儀檢測ABL-N干預(yù)后Lewis肺癌細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期改變

5、。不同終濃度ABL-N培養(yǎng)Lewis肺癌細(xì)胞48 h后,經(jīng)過PI染色,流式細(xì)胞儀定量檢測不同濃度組的細(xì)胞凋亡率,并分析細(xì)胞周期改變。
　　 5 Western blot檢測不同濃度藥物干預(yù)細(xì)胞48 h后細(xì)胞中Bax、Bcl-2、p53蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1不同終濃度(2.5、5、10、20μg/mL)ABL-N培養(yǎng)Lewis肺癌細(xì)胞,12小時抑制率為7.6％,8.9％,16.5％和73.4％,I

6、C50為14.0μg/mL;24小時抑制率17.7％,25.6％,60.3％和89.2％,IC50為7.3μg/mL;48小時抑制率15.3％,29.9％,89.9％和94.2％,IC50為5.7μg/mL。
　　 2利用倒置顯微鏡觀察10μg/mL ABL-N處理48 h后細(xì)胞的形態(tài),表現(xiàn)為細(xì)胞體積減小,細(xì)胞間隙增大。熒光顯微鏡觀察10μg/mL ABL-N處理組細(xì)胞培養(yǎng)48 h后細(xì)胞核的變化,處理組細(xì)胞染色質(zhì)聚集、固縮或斷裂

7、,有凋亡小體生成。
　　 3 DNA裂解片段凝膠電泳分析:ABL-N對DNA的裂解呈時間-劑量依賴性。不同終濃度(5、10、20μg/mL)ABL-N處理組48 h與72 h均出現(xiàn)梯狀帶,是典型的凋亡生化特征。
　　 4流式細(xì)胞儀檢測:不同終濃度(10、20μg/mL)ABL-N培養(yǎng)Lewis肺癌細(xì)胞48 h后流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率分別為21.2％和50.9％,且凋亡圖中可見明顯的凋亡小峰,即Sub-G1期細(xì)胞。細(xì)胞周