IDO基因轉(zhuǎn)染小鼠Lewis肺癌細(xì)胞誘導(dǎo)Treg細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文IDO基因轉(zhuǎn)染小鼠Lewis肺癌細(xì)胞誘導(dǎo)Treg細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究姓名：謝啟超申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：陳正堂20080501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文細(xì)胞，同時(shí)設(shè)置空白對照組(Lewis細(xì)胞)及空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(LewisEGFP細(xì)胞)，利用transwell侵襲小室，檢測三種細(xì)胞在形態(tài)學(xué)和侵襲力等生物學(xué)行為方面的區(qū)別；再將Lewis—IDO、Lewis—EGFP和Lewis肺癌細(xì)胞分別與小鼠T淋巴細(xì)胞

2、混合培養(yǎng)，利用流式細(xì)胞技術(shù)分析三種細(xì)胞對Treg細(xì)胞的誘導(dǎo)增殖作用；最后將三種細(xì)胞分別種植到C57小鼠，檢測小鼠外周血和種植瘤中Treg細(xì)胞的增殖、種植瘤和轉(zhuǎn)移灶的形成，1一MT通過加入小鼠飲用水中的方式發(fā)揮作用，通過對小鼠種植瘤內(nèi)IDO基因表達(dá)和Treg細(xì)胞增殖檢測驗(yàn)證對腫瘤局部免疫耐受的調(diào)控作用。結(jié)果：1、肺癌組織、瘤周正常肺組織和肺良性病變組織中IDO表達(dá)陽性率分別為677％(42／62)、O和133％(2／15)，前者與后二者比

3、較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Po05)，ID0陽性表達(dá)率與Treg細(xì)胞陽性率之間具有非常顯著相關(guān)性(PO01)。2、IDO基因成功轉(zhuǎn)染到小鼠Lewis肺癌細(xì)胞，與Lewis—EGFP細(xì)胞和Lewis細(xì)胞相比，Lewis—ID0細(xì)胞貼壁比例增加，形態(tài)變?yōu)殚L梭形，偽足明顯增多延長，前二者形態(tài)相似；Lewis—IDO細(xì)胞侵襲能力增強(qiáng)，破壞matrigel基質(zhì)蛋白膠層進(jìn)入下室內(nèi)的細(xì)胞數(shù)明顯增多，Lewis—ID0、Lewis—EGFP及Lewis細(xì)胞分

4、別為2374221、166O142和1856195，前者與后二者比較具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)；Lewis—IDO細(xì)胞與小鼠T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)后，Treg細(xì)胞增殖明顯，與Lewis—EGFP細(xì)胞(62O36)％vs(50052)％，)及Lewis細(xì)胞(62036)％vs(4904)％相比統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(PO05)。3、15只種植Lewis—IDO細(xì)胞的小鼠發(fā)生肝肺轉(zhuǎn)移的小鼠數(shù)量及轉(zhuǎn)移灶為12只和44個(gè)轉(zhuǎn)移灶，種植Lewis—EGFP及

5、Lewis細(xì)胞的小鼠分別為5只7個(gè)轉(zhuǎn)移灶及4只7個(gè)轉(zhuǎn)移灶，前者與后二者比較具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=O01)；流式分析結(jié)果表明，種植Lewis—IDO細(xì)胞的小鼠外周血中Treg細(xì)胞比例明顯高于Lewis—EGFP細(xì)胞組和Lewis細(xì)胞組，其比例分別為(13745)％、(8933)％和(9234)％，前者與后二者比較具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(尸005)；從平均存活時(shí)間來看，種植Lewis—IDO、Lewis—EGFP和Lewis細(xì)胞的小鼠平均存活