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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
本實(shí)驗(yàn)以不同劑量調(diào)衡方(THP)含藥血清對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),通過(guò)檢測(cè)含藥血清對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡的影響研究其抑瘤作用,同時(shí)檢測(cè)含藥血清對(duì)STAT3、STAT5、Bcl-2、Bax基因表達(dá)的影響,從而進(jìn)一步研究THP抑瘤作用的分子機(jī)制,為深入認(rèn)識(shí)中醫(yī)藥抗腫瘤作用提供科學(xué)依據(jù)。
方法:
1.制備SD大鼠THP含藥血清:隨機(jī)分成4組即THP大、中、小劑量組及正常對(duì)照組,每組各8只,連續(xù)給藥5天后,僅
2、給水12h,再給予THP灌胃1天,腹腔麻醉,心臟內(nèi)采血,血清離心并滅活,用0.45um濾器過(guò)濾分裝,-70℃冰箱凍存。
2.以THP含藥血清大、中、小劑量,AG490(25umol/L)及中劑量THP含藥血清+AG490(25umol/L)對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),并設(shè)立陰性對(duì)照組(SD大鼠正常血清)。
3.用MTT法檢測(cè)上述六組對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞干預(yù)24h、48h、72h后細(xì)胞增殖的狀況;吖啶橙染色觀察干預(yù)L
3、ewis肺癌細(xì)胞的凋亡狀況。
4.RT-PCR法檢測(cè)不同含藥血清干預(yù)后Lewis肺癌細(xì)胞中STAT3、STAT5和Bcl-2、Bax的基因表達(dá)水平。
結(jié)果:
1.MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示,在不同時(shí)間段THP含藥血清對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞增殖有著顯著抑制作用(P<0.01),抑制率隨著藥物濃度的增加和干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)而增高,且中劑量+AG490組比AG490組對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞有明顯的抑制作用(P<0.01);
4、r> 2.吖啶橙染色顯示,THP含藥血清各劑量組均可對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞凋亡起促進(jìn)作用,其中THP中劑量+AG490組作用最顯著(P<0.01);
3.RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果顯示,THP含藥血清干預(yù)Lewis肺癌細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)STAT3、STAT5和Bcl-2均為低表達(dá)(P0.01),Bax為高表達(dá)(P<0.01);中劑量+AG490組在六組中STAT3、STAT5和Bcl-2基因表達(dá)最低,Bax基因表達(dá)最高。
結(jié)
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