L-ficolin基因第八外顯子多態(tài)性與兒童反復(fù)呼吸道感染相關(guān)性研究.pdf

1、目的：反復(fù)呼吸道感染（recurrent respiratory tract infection RRTI）是兒童期常見病，其發(fā)病與多種因素有關(guān)，而免疫功能狀態(tài)尤受關(guān)注。近年固有免疫系統(tǒng)中的免疫分子L-ficolin與RRTI的關(guān)系研究日益增多。L-ficolin是脊椎動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物體內(nèi)廣泛存在的寡聚蛋白，有調(diào)理素作用，它包括一個(gè)膠原樣結(jié)構(gòu)域和一個(gè)纖維素樣結(jié)構(gòu)域（fibrinogen-like domain，F(xiàn)BG）。通過纖維素樣結(jié)構(gòu)

2、域L-ficolin可以和革蘭氏陽(yáng)性及陰性細(xì)菌[如化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、鼠傷寒沙門氏菌、大腸埃希桿菌]等含有N-乙酰葡糖胺（N-acetylglucosamine GlcNAc）糖配基的微生物結(jié)合，激活MBL-相關(guān)絲氨酸蛋白酶-1、2（MBL-Associated Serine ProteasesMASP-1，2），經(jīng)過甘露聚糖結(jié)合凝集素（Inannan binding lectin MBL）途徑激活補(bǔ)體系統(tǒng)，最終消滅病原體，是人體

3、抵御感染第一道防線中的重要免疫分子。編碼L-ficolin的基因（Ficolin2 gene FCN2）位于9q34染色體上，其啟動(dòng)子及外顯子都具有多態(tài)性。啟動(dòng)子上三個(gè)位點(diǎn)（-986，-602和_4）多態(tài)性與L-ficolin血清濃度有關(guān)，第八外顯子多態(tài)性與FBG結(jié)合能力有關(guān)。在第八外顯子上兩個(gè)位點(diǎn)Thr236Met和Ala258Ser發(fā)生非同義氨基酸替換，Thr236Met（C>T）形成的FBG與糖配基結(jié)合力較弱，而Ala258Ser

4、（G>T）所形成的FBG與糖配基結(jié)合力較強(qiáng)。已有多項(xiàng)研究證實(shí)RRTI患兒血清L-ficolin濃度明顯下降，這種降低是先天的，并非疾病所導(dǎo)致的結(jié)果，而且啟動(dòng)子基因多態(tài)性決定著L-ficolin的血清濃度，那么決定FBG結(jié)合力強(qiáng)弱的第八外顯子多態(tài)性是否與RRTI相關(guān)，F(xiàn)CN2能否成為RRTI致病的候選基因，為了探討這一問題，我們分析了這兩個(gè)位點(diǎn)基因型及等位基因頻率在常州地區(qū)漢族RRTI患兒及正常對(duì)照組兒童中的分布，以期發(fā)現(xiàn)L-ficoli

5、n基因第八外顯子多態(tài)性是否與RRTI相關(guān)，能否成為RRTI的預(yù)測(cè)基因或其中之一。
　　 方法：采用病例對(duì)照研究方法，選取2008年2月～2009年2月間在常州一院就診的江蘇常州市兒童，均為一院兒科病房住院兒童。其中RRTI104例，對(duì)照組兒童214例，RRTI診斷標(biāo)準(zhǔn)采用1987年中華兒科學(xué)會(huì)反復(fù)呼吸道感染的標(biāo)準(zhǔn)。通過聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction PCR）進(jìn)行目的DNA擴(kuò)增，根據(jù)堿基淬滅探針技

6、術(shù)檢測(cè)FCN2第八外顯子Thr236Met和Ala258Ser位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）。采用基因計(jì)數(shù)法及x2檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法了解兩組兒童是否存在差異性。
　　 結(jié)果：共檢測(cè)反復(fù)呼吸道感染患兒（病例組）104例，對(duì)照組214例。兩組性別、年齡無(wú)顯著差異性。Thr236Met位點(diǎn)基因型分布：野生純合子CC型在兩組中分別占91.3％和90.2％，雜合子TC型分別占8

7、.7％和9.8％，兩組中均未檢出突變體純合子基因型-TT。基因型，兩組間基因型分布的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；突變型T等位基因頻率在兩組中分別為4.3％和4.9％，經(jīng)檢驗(yàn)兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。Ala258Ser位點(diǎn)基因型分布：野生純合子GG基因型分別是63.5％和66.4％，TG雜合子基因型分別是31.7％和31.3％，突變純合子TT基因型分別占4％和2％，兩組間比較基因型分布無(wú)顯著差異；突變型T等位基因頻率在兩組中分別為20.7