自噬和Rab9在APPswe-PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠神經(jīng)元變性中的作用.pdf

1、目的
　　以APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠為對(duì)象,研究Rab9及自噬在阿爾茨海默病神經(jīng)元變性過程中的作用。
　　方法
　　1.采用PCR技術(shù)對(duì)小鼠基因型進(jìn)行鑒定。
　　2.通過曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和新穎物體探索實(shí)驗(yàn)分別對(duì)6月齡和12月齡Tg-APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因小鼠和同齡同性別野生型小鼠進(jìn)行自主探索活動(dòng)和情感變化的檢測(cè)。
　　3.采用免疫組化和免疫熒光技術(shù)分別對(duì)12月齡Tg-APPswe/PS1dE

2、9轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型兩組小鼠腦組織中Aβ1-16、LC3B、Rab9和Vimentin的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。
　　4.采用免疫熒光技術(shù)對(duì)12月齡的Tg-APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織進(jìn)行vimentin和硫磺素-S雙重標(biāo)記以顯示老年斑與vimentin陽性細(xì)胞的空間位置關(guān)系。
　　5.采用WesternBlot技術(shù)分別對(duì)12月齡Tg-APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠腦組織中LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ、R

3、ab9和Vimentin蛋白進(jìn)行定量檢測(cè)。
　　結(jié)果
　　1.在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中,6月齡Tg-APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠的探索活性與對(duì)照組野生型小鼠相比無明顯變化,且不存在焦慮傾向;12月齡時(shí),Tg-APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因小鼠的探索活性降低且可能更具有焦慮傾向(P<0.05);而在新物體識(shí)別任務(wù)中,轉(zhuǎn)基因小鼠與野生型小鼠表現(xiàn)類似,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.12月齡Tg-APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小

4、鼠的新皮層及海馬區(qū)域有大量呈典型“有致密核心”的老年斑分布。
　　3.LC3B分布于新皮層神經(jīng)細(xì)胞及海馬錐體神經(jīng)元的核周及突起;12月齡的Tg-APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)LC3B和LC3B-Ⅱ的表達(dá)較同齡野生型小鼠明顯增多(P=0.0005,P<0.0001)。
　　4.Rab9表達(dá)呈顆粒狀,聚集為“半月形”,分布于核周區(qū);12月齡的Tg-APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)Rab9的表達(dá)與同齡野生型小

5、鼠相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　5.Vimentin主要分布在神經(jīng)細(xì)胞核周及神經(jīng)突起中。在12月齡的Tg-APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠皮層區(qū)的老年斑周圍可以見到vimentin陽性細(xì)胞聚集;而在海馬區(qū)域,vimentin陽性細(xì)胞數(shù)則較同齡野生型小鼠明顯減少(P=0.005);腦組織中的viemntin總的表達(dá)水平較同齡野生型小鼠顯著降低(P=0.0289)。
　　結(jié)論
　　APPswe/PS1dE9