腦苷肌肽對APP-PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的保護作用及機制研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一種與年齡相關(guān)的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病。引起AD的確切病因及機理迄今尚未完全明確，可能由多種因素共同作用導(dǎo)致。目前，AD的臨床治療方法極為有限，尚無一種治療可以完全逆轉(zhuǎn)其神經(jīng)退行性變進程。腦苷肌肽注射液含多種神經(jīng)節(jié)苷脂、小分子多肽、氨基酸等，具有神經(jīng)修復(fù)與再生、神經(jīng)保護、營養(yǎng)與供能等多重作用，在國內(nèi)已經(jīng)廣泛用于中樞及周圍神經(jīng)損傷的治療?；贏D多因素致病

2、機理，具有多靶點治療作用的腦苷肌肽可能是AD的一種潛在治療藥物。建立可靠的動物模型對AD病因和發(fā)病機制的探討及防治藥物的開發(fā)均具有重要作用。目前AD動物模型種類很多，大多只能模擬AD的部分特征。其中轉(zhuǎn)基因小鼠模型因其所引起的病理改變相對單一，產(chǎn)生病理變化時間相對較短，能夠更好的模擬AD的病理特征和行為改變，已成為國內(nèi)外研究AD的病因、發(fā)病機制及治療策略的一種較理想的動物模型。應(yīng)用APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型觀察腦苷肌肽對AD的治療作用

3、，同類研究在國內(nèi)外未見報道。
　　本實驗應(yīng)用腦苷肌肽治療APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠，研究其延緩或阻斷AD病情進展的療效，以期尋找預(yù)防和治療AD的有效措施，并為下一步臨床試驗提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　選用5月齡的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠作為AD模型，非轉(zhuǎn)基因C57小鼠作為正常對照，預(yù)實驗共分為5紐，每組12只，分別為nTg組、Tg組、腦苷肌肽6.6mL/kg/day組、腦苷肌肽13.2mL/kg/day組和安理申

4、組;正式實驗共分7組，每組15只，分別為nTg組、Tg組、腦苷肌膚3.3mL/kg/day組、腦苷肌肽6.6mL/kg/day組、腦苷肌膚13.2mL/kg/day組、安理申組和腦苷肌肽/安理申聯(lián)合用藥組，連續(xù)給藥1個月后對小鼠進行Morris水迷宮檢測，應(yīng)用HE觀察海馬神經(jīng)元的一般形態(tài)，化學(xué)比色法測定SOD、MDA、GSH-PX、CAT的含量，ELISA法測定腦組織不可溶性Aβ42及Aβ40、可溶性Aβ42及Aβ40、IL-10、TN

5、F-a、IL-6的含量以及血清IL-10、TNF-a、IL-6的含量，免疫組化染色觀察Aβ斑塊、Bcl-2、 Bax、 NeuN、活化小膠質(zhì)細胞表達，Western法測定caspase-3的含量，RT-PCR法測定bcl-2、bax、caspase-3、IL-10、TNF-a、 IL-6、 IL-1β的基因表達水平。
　　結(jié)果：
　　1.腦苷肌肽能夠明顯減少APP/PS1小鼠逃避潛伏期，增加目標象限停留時間。2.腦苷肌肽能夠

6、明顯降低APP/PS1小鼠海馬及皮層總Aβ斑塊及纖維性斑塊的沉積，明顯降低腦組織勻漿不可溶性Aβ42、不可溶性Aβ40及可溶性Aβ42的含量。3.腦苷肌膚能夠明顯增加APP/PS1小鼠腦組織勻漿SOD、GSH-PX、CAT的活性，明顯降低MDA的水平。4.腦苷肌膚能夠改善APP/PS1小鼠海馬神經(jīng)元的損傷，明顯增加海馬NeuN、Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表達及Bcl-2、Bcl-2/Bax基因表達水平，明顯降低海馬caspase

7、-3蛋白及基因表達水平。5.腦苷肌肽能夠明顯減少APP/PS1小鼠皮層活化小膠質(zhì)細胞的數(shù)量，降低皮層TNF-a、IL-6的含量及TNF-a、IL-6、IL-1β基因表達水平，提高大腦皮層及外周血清IL-10含量及基因表達水平。
　　結(jié)論：
　　1.研究發(fā)現(xiàn)腦苷肌膚連續(xù)用藥1個月能夠明顯提高APP/PS1小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力，提示腦苷肌肽可能是AD潛在的治療藥物。
　　2.腦苷肌膚對APP/PS1小鼠的保護作用在6.6m

8、L/kg/day治療組和聯(lián)合用藥組效果更加明顯，明確了腦苷肌肽的有效劑量。
　　3.腦苷肌肽對APP/PS1小鼠的保護作用涉及多個方面:
　　(1)腦苷肌肽抑制APP/PS1小鼠腦內(nèi)Aβ斑塊沉積，降低可溶及不可溶性Aβ含量，進而減少Aβ對神經(jīng)元的毒性損傷。
　　(2)腦苷肌肽能夠增加抗氧化酶活性，降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的含量，下調(diào)促凋亡因子的表達，上調(diào)凋亡抑制因子的表達，說明腦苷肌肽通過抑制神經(jīng)元氧化應(yīng)激，抑制細胞凋亡而保