甘草素對去勢APP-PS1 雙轉基因小鼠作用的初步研究.pdf

1、目的：
　　本課題通過對APP/PS1雙轉基因小鼠行雙側卵巢切除術建立絕經(jīng)模型，（1）探討雙側卵巢切除后不同時間段對阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease, AD）癡呆模型小鼠認知記憶功能及自噬的影響。（2）探討植物雌激素-甘草素對去勢1周APP/PS1雙轉基因小鼠認知記憶功能及自噬的作用，為絕經(jīng)女性 AD患者的治療提供新的線索。
　　方法：
　　1、第一部分：建立穩(wěn)定可靠的小鼠絕經(jīng)（雙側卵巢切除，Bil

2、ateral ovariectomy，OVX）模型：將3月齡雌性APP/PS1雙轉基因小鼠分別行雙側卵巢切除術和假手術，同齡 C57作為正常對照。術后1周、1月、3月運用Morris水迷宮進行行為學檢測，并分別稱量小鼠子宮重量，免疫組化檢測老年斑的變化，ELISA檢測 Aβ40、Aβ42水平，Western blot檢測Beclin1、Lc3、P62的蛋白水平變化。
　　2、第二部分：觀察甘草素（Liquirtigenin, LG

3、）對去勢1周APP/PS1雙轉基因小鼠作用：
　?。?）將3月齡雌性APP/PS1雙轉基因小鼠隨機分為以下四組：假手術+試劑對照組(sham)、雙側卵巢切除+試劑對照組（OVX）、雙側卵巢切除+甘草素組（OVX+ LG）和雙側卵巢切除+雌二醇（17β-estradiol，E2）組（OVX+E2）；（2）模型建立1周后，各組給予相應試劑或藥物處理，共處理90天；（3）Morris水迷宮實驗檢測各組小鼠空間學習記憶能力；（4）稱量子宮

4、重量；（5）免疫組化和甲硫素染色檢測小鼠腦內老年斑沉積；（6）ELISA檢測腦內Aβ含量；（7）采用western blot檢測ERα、ERβ、Beclin1、Lc3、P62蛋白表達情況。
　　結果：
　　第一部分結果：雙側卵巢切除后1周對 AD小鼠空間學習能力的影響無統(tǒng)計學差異，雙側卵巢切除1月、3月后，小鼠出現(xiàn)空間學習記憶能力減退。雙側卵巢切除會使小鼠子宮萎縮，重量減輕。雙側卵巢切除后1周，APP/PS1雙轉基因小鼠腦內

5、老年斑、Aβ均沒有明顯變化；手術后1月，可觀察到老年斑數(shù)量和斑塊面積均大于假手術組，Aβ40變化無統(tǒng)計學差異，Aβ40顯著增多；WB檢測自噬相關蛋白水平，可看到beclin1隨著手術時間延長呈不斷下降趨勢；LC3手術后一周增加，術后1月、3月呈下降趨勢；P62在術后一周無明顯差異，術后1月、3月呈升高趨勢。
　　第二部分結果：甘草素治療3月后，Morris水迷宮實驗顯示，甘草素治療組小鼠空間學習能力提高；甘草素治療對子宮的影響無統(tǒng)

6、計學差異，E2治療使子宮重量增加；甘草素治療與E2治療一樣均能使老年斑、Aβ減少，且兩組間無統(tǒng)計學差異；甘草素治療上調 ERβ作用顯著，而E2治療均能顯著上調ERα、ERβ；甘草素、E2治療均能提高Beclin1、LC3蛋白水平，降低P62水平。
　　結論：
　　1、卵巢切除，性激素水平下降，會影響AD小鼠空間學習記憶能力，加重AD老年斑、Aβ沉積，性激素缺乏越久，表現(xiàn)越明顯，并且這些變化可能與自噬調節(jié)相關；
　　2、