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文檔簡(jiǎn)介
1、第一部分原花青素對(duì)大鼠下肢缺血后外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞生成的影響
目的:探索原花青素在大鼠下肢缺血性血管新生中對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞誘導(dǎo)生成所起到的作用。
方法:將SD雄性大鼠隨機(jī)分為三組:原花青素組(PC組),左旋精氨酸組(LA組)和生理鹽水對(duì)照組(CL組),每組6只。戊巴比妥鈉麻醉后仰臥位固定,鈍性分離皮膚肌肉等外周組織后,手術(shù)分別結(jié)扎動(dòng)物左下肢腘動(dòng)脈、股動(dòng)、靜脈及其分支后縫合,建立下肢缺血模型。三組動(dòng)物分別給予原花青素,左旋精
2、氨酸以及生理鹽水,每只動(dòng)物每日均灌胃給藥一次。術(shù)后7天,經(jīng)大鼠心尖處至左心室抽取血液約5-10ml,分離、提取內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)。培養(yǎng)12天以后,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Sca-1/Flk-1雙陽(yáng)性細(xì)胞比率;用Transwell小室檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響;用小管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)藥物對(duì)新生血管生成狀態(tài)的影響。
結(jié)果:流式細(xì)胞測(cè)定Sca-1/Flk-1雙陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量占全部細(xì)胞比率,PC組高于LA組和CL組[(1.13±0.10)%比(
3、0.64±0.13)%和(0.43±0.13)%,P<0.05],LA組與CL組對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Transwell小室檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響,PC組和LA組明顯高于CL組[(51.60±16.01)和(28.80±4.87)比(15.00±2.24),P<0.001];小管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)藥物對(duì)新生血管生成狀態(tài)的影響結(jié)果,PC組和LA組均明顯高于CL組,[(25.30±5.31)和(24.60±3.86)比(15.20±3.36
4、),P<0.001],PC組與LA組對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)論:原花青素能有效動(dòng)員EPC,從功能上促進(jìn)EPC遷移,并誘導(dǎo)其更快分化為新生內(nèi)皮細(xì)胞,從而促進(jìn)新生血管的更快生成。
第二部分原花青素對(duì)大鼠下肢缺血后血管新生相關(guān)機(jī)制的研究
目的:探討原花青素對(duì)大鼠下肢缺血后血管新生的影響及其相關(guān)機(jī)制。
方法:將SD雄性大鼠隨機(jī)分為三組:原花青素組(PC組),左旋精氨酸組(LA組)和生理鹽水對(duì)照組(CL組
5、),每組6只。戊巴比妥鈉麻醉后仰臥位固定,鈍性分離皮膚肌肉等外周組織后,分別手術(shù)結(jié)扎動(dòng)物左下肢腘動(dòng)脈、股動(dòng)、靜脈及其分支后縫合,建立下肢缺血模型,兩組大鼠每日均經(jīng)灌胃給藥。于術(shù)后第14天取大鼠缺血下肢的內(nèi)收肌缺血組織。用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CD31在缺血肌肉組織中的表達(dá)以示新生血管數(shù)量,用蛋白印跡法檢測(cè)HIF-1蛋白表達(dá)量,用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法測(cè)定血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)含量。
結(jié)果:PC組和 LA組用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)在缺
6、血肌肉組織中的毛細(xì)血管標(biāo)記物CD31計(jì)數(shù)明顯高于CL組[(170.00±7.60)個(gè)/視野和(169.00±15.00)個(gè)/視野比(111.00±7.60)個(gè)/視野,P<0.001];蛋白印跡法檢測(cè)HIF-1蛋白表達(dá)量,PC組表達(dá)量明顯高于LA組和CL組[(1.89±0.49)比(0.74±0.08)和(0.54±0.42),P<0.01],LA組與CL組對(duì)比結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法測(cè)定血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)含量,P
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