原花青素對(duì)大鼠下肢缺血后血管新生的影響及其機(jī)制的探索.pdf

1、第一部分原花青素對(duì)大鼠下肢缺血后外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞生成的影響
　　目的：探索原花青素在大鼠下肢缺血性血管新生中對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞誘導(dǎo)生成所起到的作用。
　　方法：將SD雄性大鼠隨機(jī)分為三組：原花青素組（PC組），左旋精氨酸組（LA組）和生理鹽水對(duì)照組(CL組)，每組6只。戊巴比妥鈉麻醉后仰臥位固定，鈍性分離皮膚肌肉等外周組織后，手術(shù)分別結(jié)扎動(dòng)物左下肢腘動(dòng)脈、股動(dòng)、靜脈及其分支后縫合，建立下肢缺血模型。三組動(dòng)物分別給予原花青素，左旋精

2、氨酸以及生理鹽水，每只動(dòng)物每日均灌胃給藥一次。術(shù)后7天，經(jīng)大鼠心尖處至左心室抽取血液約5-10ml，分離、提取內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPC）。培養(yǎng)12天以后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Sca-1/Flk-1雙陽(yáng)性細(xì)胞比率；用Transwell小室檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響；用小管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)藥物對(duì)新生血管生成狀態(tài)的影響。
　　結(jié)果：流式細(xì)胞測(cè)定Sca-1/Flk-1雙陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量占全部細(xì)胞比率，PC組高于LA組和CL組[（1.13±0.10）％比（

3、0.64±0.13）%和（0.43±0.13）%，P＜0.05]，LA組與CL組對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Transwell小室檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響，PC組和LA組明顯高于CL組[（51.60±16.01）和（28.80±4.87）比（15.00±2.24），P＜0.001]；小管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)藥物對(duì)新生血管生成狀態(tài)的影響結(jié)果，PC組和LA組均明顯高于CL組，[（25.30±5.31）和（24.60±3.86）比（15.20±3.36

4、），P＜0.001]，PC組與LA組對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：原花青素能有效動(dòng)員EPC，從功能上促進(jìn)EPC遷移，并誘導(dǎo)其更快分化為新生內(nèi)皮細(xì)胞，從而促進(jìn)新生血管的更快生成。
　　第二部分原花青素對(duì)大鼠下肢缺血后血管新生相關(guān)機(jī)制的研究
　　目的：探討原花青素對(duì)大鼠下肢缺血后血管新生的影響及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：將SD雄性大鼠隨機(jī)分為三組：原花青素組（PC組），左旋精氨酸組（LA組）和生理鹽水對(duì)照組(CL組

5、)，每組6只。戊巴比妥鈉麻醉后仰臥位固定，鈍性分離皮膚肌肉等外周組織后，分別手術(shù)結(jié)扎動(dòng)物左下肢腘動(dòng)脈、股動(dòng)、靜脈及其分支后縫合，建立下肢缺血模型，兩組大鼠每日均經(jīng)灌胃給藥。于術(shù)后第14天取大鼠缺血下肢的內(nèi)收肌缺血組織。用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CD31在缺血肌肉組織中的表達(dá)以示新生血管數(shù)量，用蛋白印跡法檢測(cè)HIF-1蛋白表達(dá)量，用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法測(cè)定血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）含量。
　　結(jié)果：PC組和 LA組用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)在缺

6、血肌肉組織中的毛細(xì)血管標(biāo)記物CD31計(jì)數(shù)明顯高于CL組[（170.00±7.60）個(gè)/視野和（169.00±15.00）個(gè)/視野比（111.00±7.60）個(gè)/視野，P＜0.001]；蛋白印跡法檢測(cè)HIF-1蛋白表達(dá)量，PC組表達(dá)量明顯高于LA組和CL組[（1.89±0.49）比（0.74±0.08）和（0.54±0.42），P＜0.01]，LA組與CL組對(duì)比結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法測(cè)定血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）含量，P