γδT細胞體外抑制未成熟樹突狀細胞向破骨細胞轉分化.pdf

1、目的：觀察多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）患者及健康志愿者外周血γδT細胞體外擴增情況；探討γδT細胞對人外周血來源未成熟樹突狀細胞（immature dendritic cell,imDC）轉分化為破骨細胞（osteoclast cell,OC）過程的影響。
　　方法：（1）采集MM患者及健康志愿者外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMNC），應用1μM

2、唑來膦酸（zoledronate,Zol）及100IU/ml重組人白細胞介素-2（interleukin-2,IL-2體外激活擴增γδT細胞，培養(yǎng)第7天采用流式細胞術和細胞計數(shù)觀察γδT細胞產率；（2）由粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（granulocyte macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF）及白細胞介素-4（interleukin-4,IL-4）誘導人PBMNC轉化為imDC，培養(yǎng)至

3、第6天流式細胞術檢測CD14、CD1a和CD51/61;imDC在細胞核因子B受體活化因子配基（recep tor activator fnuclear factor B ligand,RANKL）和巨噬細胞集落刺激因子（macrophage colony-stimulating factor,M-CSF）作用下繼續(xù)培養(yǎng)誘導為OC；（3）免疫磁珠分選法收集第7天的人外周血γδT細胞，收集第6天的imDC，細胞共培養(yǎng)體系共培養(yǎng)γδT細胞及

4、imDC（γδT細胞數(shù)量：imDC數(shù)量=10:1），上室為γδT細胞，下室為imDC，于共培養(yǎng)7天或14天后收集下室細胞，采用以下方法了解γδT細胞對imDC轉分化為OC過程的影響：耐酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色觀察TRAP+多核細胞、甲苯胺藍染色觀察牙本質片骨吸收陷窩；（4）將上述磁珠分選的γδT細胞與培養(yǎng)的imDC直接接觸共培養(yǎng)于板內（γδT細胞數(shù)量：imD

5、C數(shù)量=10:1），觀察γδT細胞對imDC轉分化為OC過程的影響；（5）收集γδT細胞-imDC間接共培養(yǎng)組、γδT細胞單獨培養(yǎng)組及 imDC單獨培養(yǎng)組的上清，用 ELISA檢測腫瘤壞死因子(tumo rnecros is factor-alpha,TNF-α）和I型膠原C-末端肽（type I collagen carboxy-terminal peptide,CTX-1）濃度，探討γδT細胞對imDC發(fā)揮作用的可能機制。
　

6、　結果：（1）Zol及重組人IL-2可在體外培養(yǎng)條件下大量擴增 MM患者外周血γδT細胞，擴增產率與健康志愿者無統(tǒng)計學差異（P>0.05）；（2）證實由外周血誘導分化的imDC在RANKL和M-CSF作用下可轉分化為OC；（3）γδT細胞與imDC間接接觸共培養(yǎng)條件下，每低倍鏡視野 TR AP+多核細胞數(shù)和牙本質骨吸收面積均顯著低于對照組，顯示OC生成減少；（4）γδT細胞與imDC直接接觸共培養(yǎng)條件下，γδT細胞亦可減少imDC誘導生