龍膽苦苷的生物轉(zhuǎn)化與枇杷葉化學(xué)成分的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、麻花秦艽(Gentiana straminea Maxim)屬于龍膽科植物,龍膽苦苷在其中含量可高達18%。龍膽苦苷具有抗炎鎮(zhèn)痛、保肝利膽、健胃抗氧化以及抗腫瘤等功效。
   本實驗研究了麻花秦艽中龍膽苦苷的富集,5種真菌對龍膽苦苷的生物轉(zhuǎn)化,以及轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化。除此之外,還對枇杷葉的化學(xué)成分及最佳提取工藝進行了研究。
   本文主要研究工作如下:
   (1)采用工業(yè)CH3CH2OH提取,有機溶劑萃取以及正相硅

2、膠柱層析等方法,從麻花秦艽醇提水溶物的n-BuOH萃取層中得到單體化合物。經(jīng)核磁共振(NMR)鑒定其為龍膽苦苷,利用高效液相色譜法(HPLC)測得其純度達到98%以上。
   (2)利用黑曲霉(Aspergillus niger)、米根霉(Rhizopus oryzae)、少根根霉(Rhizopus orrizus)、釀酒酵母YS58(Saccharomyces cerevisiaeYS58)以及畢赤酵母GS115(Pichia

3、 pastoris GS115)5株真菌對龍膽苦苷進行生物轉(zhuǎn)化,結(jié)果表明此5株真菌都具有轉(zhuǎn)化龍膽苦苷的能力。經(jīng)薄層色譜法(TLC)以及高效液相色譜法(HPLC)檢測有三個轉(zhuǎn)化產(chǎn)物生成。經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)定性分析,黑曲霉、米根霉、少根根霉以及畢赤酵母GS115的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物之一確定為新產(chǎn)物龍膽酸(2,5-dihydroxybenzoic acid)。應(yīng)用面積歸一法計算該5株真菌的轉(zhuǎn)化率發(fā)現(xiàn),米根霉對龍膽苦苷的轉(zhuǎn)化率最高,達到

4、33%。黑曲霉、少根根霉、釀酒酵母YS58以及畢赤酵母GS115對龍膽苦苷的轉(zhuǎn)化率分別為27%、26%、26%以及27%。
   (3)利用米根霉(Rhizopus oryzae)作為底物龍膽苦苷單體化合物生物轉(zhuǎn)化的微生物體,采用單因素實驗及正交實驗確定龍膽苦苷生物轉(zhuǎn)化的最佳工藝條件是:pH為6.0、培養(yǎng)方式為32℃接種,37℃轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)化時間為5d、葡萄糖濃度為8g/L,在最佳工藝條件下龍膽苦苷的生物轉(zhuǎn)化率為38%。葡萄糖濃度、

5、pH、培養(yǎng)方式、轉(zhuǎn)化時間、pH與葡萄糖濃度的交互作用這幾個因素對龍膽苦苷的生物轉(zhuǎn)化率影響高度顯著,轉(zhuǎn)化時間與葡萄糖濃度的交互作用、pH與培養(yǎng)方式的交互作用對龍膽苦苷的生物轉(zhuǎn)化率影響顯著,而其它因素及交互作用影響不顯著。
   (4)采用工業(yè)CH3CH2OH提取,有機溶劑萃取以及正相硅膠、ODS硅膠、Toyopearl HW-40以及Sephadex LH-20等柱層析技術(shù),從枇杷葉醇提水溶物的n-BuOH萃取層中得到3個單體化合

6、物。應(yīng)用核磁共振(NMR)鑒定所得單體化合物分別為:橙花叔醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷、橙花叔醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素。
   (5)采用單因素實驗和正交實驗對枇杷葉的提取工藝進行優(yōu)化,實驗結(jié)果表明最優(yōu)工藝條件為:料液比是1∶10、CH3CH2OH

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