龍膽苦苷的生物轉(zhuǎn)化與枇杷葉化學(xué)成分的研究.pdf

1、麻花秦艽(Gentiana straminea Maxim)屬于龍膽科植物，龍膽苦苷在其中含量可高達(dá)18％。龍膽苦苷具有抗炎鎮(zhèn)痛、保肝利膽、健胃抗氧化以及抗腫瘤等功效。
　　 本實(shí)驗(yàn)研究了麻花秦艽中龍膽苦苷的富集，5種真菌對(duì)龍膽苦苷的生物轉(zhuǎn)化，以及轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化。除此之外，還對(duì)枇杷葉的化學(xué)成分及最佳提取工藝進(jìn)行了研究。
　　 本文主要研究工作如下:
　　 (1)采用工業(yè)CH3CH2OH提取，有機(jī)溶劑萃取以及正相硅

2、膠柱層析等方法，從麻花秦艽醇提水溶物的n-BuOH萃取層中得到單體化合物。經(jīng)核磁共振(NMR)鑒定其為龍膽苦苷，利用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)得其純度達(dá)到98％以上。
　　 (2)利用黑曲霉(Aspergillus niger)、米根霉（Rhizopus oryzae）、少根根霉（Rhizopus orrizus）、釀酒酵母YS58(Saccharomyces cerevisiaeYS58)以及畢赤酵母GS115(Pichia

3、 pastoris GS115)5株真菌對(duì)龍膽苦苷進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，結(jié)果表明此5株真菌都具有轉(zhuǎn)化龍膽苦苷的能力。經(jīng)薄層色譜法(TLC)以及高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè)有三個(gè)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物生成。經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)定性分析，黑曲霉、米根霉、少根根霉以及畢赤酵母GS115的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物之一確定為新產(chǎn)物龍膽酸(2，5-dihydroxybenzoic acid)。應(yīng)用面積歸一法計(jì)算該5株真菌的轉(zhuǎn)化率發(fā)現(xiàn)，米根霉對(duì)龍膽苦苷的轉(zhuǎn)化率最高，達(dá)到

4、33％。黑曲霉、少根根霉、釀酒酵母YS58以及畢赤酵母GS115對(duì)龍膽苦苷的轉(zhuǎn)化率分別為27％、26％、26％以及27％。
　　 (3)利用米根霉（Rhizopus oryzae）作為底物龍膽苦苷單體化合物生物轉(zhuǎn)化的微生物體，采用單因素實(shí)驗(yàn)及正交實(shí)驗(yàn)確定龍膽苦苷生物轉(zhuǎn)化的最佳工藝條件是:pH為6.0、培養(yǎng)方式為32℃接種，37℃轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)化時(shí)間為5d、葡萄糖濃度為8g/L，在最佳工藝條件下龍膽苦苷的生物轉(zhuǎn)化率為38％。葡萄糖濃度、

5、pH、培養(yǎng)方式、轉(zhuǎn)化時(shí)間、pH與葡萄糖濃度的交互作用這幾個(gè)因素對(duì)龍膽苦苷的生物轉(zhuǎn)化率影響高度顯著，轉(zhuǎn)化時(shí)間與葡萄糖濃度的交互作用、pH與培養(yǎng)方式的交互作用對(duì)龍膽苦苷的生物轉(zhuǎn)化率影響顯著，而其它因素及交互作用影響不顯著。
　　 (4)采用工業(yè)CH3CH2OH提取，有機(jī)溶劑萃取以及正相硅膠、ODS硅膠、Toyopearl HW-40以及Sephadex LH-20等柱層析技術(shù)，從枇杷葉醇提水溶物的n-BuOH萃取層中得到3個(gè)單體化合

6、物。應(yīng)用核磁共振(NMR)鑒定所得單體化合物分別為:橙花叔醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷、橙花叔醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素。
　　 (5)采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)對(duì)枇杷葉的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明最優(yōu)工藝條件為:料液比是1∶10、CH3CH2OH