喹乙醇單克隆抗體制備與初步應(yīng)用研究.pdf

1、喹乙醇為一種化學(xué)合成抗菌促生長劑，主要用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病，也常用作為飼料添加劑促進(jìn)動(dòng)物生長。然而，喹乙醇具有中等至明顯的蓄積毒性、遺傳毒性和誘變性，不合理的使用會造成在動(dòng)物性食品中殘留，可能對人類的健康造成潛在危害。為了建立快速靈敏的檢測喹乙醇?xì)埩裘庖叻治龇椒?，本研究制備了分泌抗喹乙醇分子的單克隆抗體，并初步應(yīng)用于肉品喹乙醇?xì)埩舻臋z測。主要研究內(nèi)容和結(jié)果包括以下方面： 用人工抗原OLA-BSA免疫4只BALB/c小鼠，

2、經(jīng)三次免疫后，分離得到抗血清建立間接ELISA方法并進(jìn)行效價(jià)測定。結(jié)果表明：包被抗原的最佳濃度為3 μg/ml；測得4只小鼠效價(jià)均達(dá)到1：12800以上。 對效價(jià)最高的小鼠進(jìn)行第四次沖擊免疫，三天后取其脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞sp2/0-Ag14進(jìn)行融合，用PEG1500進(jìn)行誘導(dǎo)。接種于5塊96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，融合率為100％。利用間接ELISA方法對融合孔進(jìn)行篩選，建立間接競爭ELISA方法對陽性孔細(xì)胞進(jìn)行篩選，選擇對游離喹乙醇親和力

3、好的細(xì)胞進(jìn)行克隆，隨后經(jīng)過三次亞克隆得到4株穩(wěn)定分泌喹乙醇單克隆抗體的細(xì)胞株，分別命名為：1E6、3G1、5A2、5C11。 用7C11采用體內(nèi)誘生腹水法制備單克隆抗體，間接ELISA法測得腹水效價(jià)達(dá)100萬以上，并對腹水進(jìn)行純化，純化后效價(jià)仍有100萬以上。該株胞染色體鑒定結(jié)果為105條。SDS-PAGE電泳方法結(jié)果表明抗體分子量為160KD。與類似物沒有交叉反應(yīng)。 采用間接競爭ELISA法測定喹乙醇，方法檢測低限為3