褪黑素單克隆抗體的制備、鑒定及初步應用.pdf

1、褪黑素(N- 乙酰-4- 甲氧基色胺,melatonin,簡稱MT).最近很多學者提供的體外研究資料表明,MT有作為自由基清除劑和總的抗氧化劑的作用.應用EPR技術證實其清除羥自由基的作用遠遠超過谷胱甘肽,黃酮和一些吲哚結構類似物如serotonin,trytophan.它清除過氧自由基劑的作用超過維生素C和GSH,這些有名的自由基清除劑.目前對MT的興趣可通過數(shù)量不斷增長的許多直接或間接與其有關論文見證,在過去十年平均每年的有關MT和

2、作用于肌受體周圍的新的化合物的論文都成倍增長.在某種意義上說,稱MT為黑暗激素,主要是由于在某一時間的特定濃度分布似乎更合適.然而缺少一種簡便、靈敏、可靠的方法來檢測MT是闡明其生理和病理作用的一個最大障礙[2-4]. 在最初嘗試用生物檢測法、氣相色譜-質譜來檢測MT在體液中的量,后來通過高效液相色譜[6-8],這些技術主要的限制是過于昂貴檢測樣品少.檢測前樣品處理復雜[3,4] .為了更進一步地研究松果體的功能,也為更深入了解藥物受體

3、的內在反應,為建立更完善的MT受體模型和設計新的可選性配體,為MT和其類似物治療應用提供堅實的基礎,我們制備和鑒定了抗MT的單克隆抗體.通過將MT用甲醛作連結劑連結到牛血清白蛋白上(BSA),采用皮下多點注射免疫小鼠得到了高效價,高親和力,較好特異性的抗MT單克隆抗體,最后獲得了5株單克隆細胞株,都能分泌針對MT的特異性抗體,建立了選擇性基團免疫分析法,用制備的抗體測定了人血清中MT的含量,作了MT的抑制標準曲線,其抑制范圍從50pg—