白菜黃萎病抗性分子鑒定技術的研究.pdf

1、大白菜（Brassica rapaL.ssp.pekinensis）原產于中國，是我國栽培面積最大的蔬菜種類，目前已逐漸成為世界性蔬菜作物。據農業(yè)部統(tǒng)計，每年我國大白菜種植面積約267萬公頃，占全國蔬菜總播種面積的15％左右，可見大白菜對我國蔬菜供應和農民增收具有重要作用。近年來，大白菜黃萎病相繼在北京、河北張家口、甘肅永登、云南通海等大白菜育種基地及規(guī)?；N植基地爆發(fā)，并迅速向周邊地區(qū)擴散，大白菜黃萎病已成為這些地區(qū)最為嚴重的病害之一

2、?？共∑贩N的種植對大白菜安全生產具有重要意義。因此，黃萎病抗病品種的選育現(xiàn)已成為大白菜育種的主要目標之一。
　　前期研究的結果已初步確定大麗輪枝菌（Verticillium dahliae）是引起大白菜黃萎病的病原菌，為進一步明確病原菌類型，本研究利用18S rDNAⅠ型內含子、線粒體SSU rDNA和細胞色素b基因序列對實驗室保存的3個病原菌分離物進行了分子鑒定;并以4個對黃萎病具有明顯抗性差異的大白菜自交系為材料，研究了接種黃

3、萎病菌后植株病癥、葉面積和葉綠素含量等的變化;采用熒光定量PCR技術，通過優(yōu)化反應體系，建立了大白菜黃萎病抗性的分子診斷技術。主要研究結果如下:
　　1.對本實驗室保存的BCHW10-2、BCHW8-35和BCHWJ-15三個黃萎病株分離物的18S rDNAⅠ型內含子、線粒體SSU rDNA和色素b基因序列進行分析，進一步確認這3個病原菌分離物屬于大麗輪枝菌，長孢類型（Verticillium dahliae var.longis

4、porum）。
　　2.對黃萎病具有明顯抗性差異的4個自交系接種病原菌后，進行病害癥狀觀察，對葉片鮮重、葉綠素和類胡蘿卜含量等生理指標進行測定，發(fā)現(xiàn)感病植株出現(xiàn)明顯的矮化和葉片黃化現(xiàn)象;與清水處理的對照植株相比，抗病和易感病品種的葉面積、葉片鮮重、葉綠素含量等都出現(xiàn)不同程度的下降，但感病品種下降的幅度明顯大于抗病品種;利用堿性品紅對接種后的葉片染色觀察發(fā)現(xiàn)，抗病品種中，品紅能夠沿維管束對整個葉片進行染色;而對感病品種，品紅不能沿維

5、管束布滿整個葉片，因此推測接種后感病品種維管束遭破壞程度比抗病品種嚴重。
　　3.利用病原菌的rDNA-ITS序列，設計合成了能對植株器官中的病原菌進行特異性擴增的引物HW1;通過優(yōu)化反應體系，利用qRT-PCR對黃萎病具有明顯抗性差異的4個自交系接種后不同時期、不同器官中黃萎病菌進行定量研究。結果顯示植株根、莖、葉中病原菌含量與自交系的抗病性呈負相關。從而建立了大白菜黃萎病抗性的定性、定量分子診斷技術，為黃萎病抗病育種奠定了基礎