銀杏葉提取物對辛伐他汀藥物代謝影響的研究.pdf

1、研究背景
　　 多藥聯合已經成為臨床治療的必要手段,我們在收獲療效的同時,也感慨由于藥物相互作用所導致的負面效應,因此研究藥物的相互作用以保證臨床用藥的安全合理,具有十分重要的現實價值。目前關于西藥之間相互作用的研究已經屢見不鮮,但是對于中西藥之間的相互作用,人們的關注和認識顯然還不夠,而鑒于臨床中西藥聯用越來越普遍的現象,研究中西藥合用時的藥物相互作用,以保證用藥的安全合理,已經刻不容緩。
　　 銀杏葉提取物作為最常用

2、的一類中藥具有多重藥理作用,包括降血脂、改善內皮細胞功能、降低血液粘稠度、清除自由基和抗動脈粥樣硬化等,在臨床常能見到同其它藥物聯合使用,辛伐他汀便是其中之一。辛伐他汀作為他汀類藥物的代表,不僅是降低LDL的一線藥物,還可以穩(wěn)定動脈斑塊,明顯減少致死性和非致死性心血管事件的發(fā)生率,其不良反應一般表現為皮疹、頭痛和胃腸不適,嚴重者可以出現肝損傷和橫紋肌溶解,威脅生命,然而無論是辛伐他汀的療效還是不良反應的發(fā)生都與其血藥濃度之間存在著明顯的

3、正相關。
　　 研究目的
　　 本實驗課題是針對銀杏葉提取物同辛伐他汀之間的相互作用進行研究,以揭示銀杏葉提取物對辛伐他汀代謝及其代謝關鍵酶CYP3A的影響,除了可以為兩藥在臨床的合理聯用提供一定的實驗依據,好可以進一步提示銀杏葉提取物同其他CYP3A底物藥物的相互作用。
　　 研究方法
　　 1實驗動物及分組
　　 雌性SD大鼠32只,體重200±20 g。將32只大鼠隨機分為4組,每組8只,分

4、別為:生理鹽水對照組(10 ml·kg-1)； PB誘導組(80 mg·kg-1)[1]；銀杏葉提取物低劑量組(20 mg·kg-1)；銀杏葉提取物高劑量組(200 mg·kg-1)。均為灌胃給藥,一天1次,連續(xù)10天。
　　 2肝微粒體制備
　　 于末次給藥后將大鼠全部斷頸處死,灌注后摘取肝臟,濾紙吸干并稱重,按照1/4(w/v)加入磷酸鹽緩沖液Ⅰ制備成肝勻漿,離心取上清液于105000 g再經兩次離心后即得肝微粒體沉

5、淀。將微粒體沉淀重懸于磷酸鹽緩沖液Ⅱ中,分裝并置于-80℃保存待用。
　　 3觀察指標
　　 3.1肝微粒體蛋白含量測定
　　 用BCA試劑盒進行肝微粒體蛋白定量分析。
　　 3.1.1牛血清白蛋白(BSA)標準曲線制作
　　 選擇波長545nm,上紫外分光光度機測A值,均做復管測定后取均值繪制標準曲線。
　　 3.1.2樣品微粒體蛋白含量測定
　　 根據BSA標準曲線來讀取蛋白濃

6、度。
　　 3.2紅霉素N-脫甲基酶(ERDase)活性測定
　　 ERDase可以反映CYP3A的活性。測定方法參考了徐淑云的《藥理實驗方法學》。
　　 3.3辛伐他汀體外代謝測定
　　 用HPLC法測定各組體外反應體系中剩余辛伐他汀的含量。
　　 3.3.1體外反應體系
　　 0.5 mL的肝微粒體反應體系中含10 mmol·L-1MgCl2、2.5 mmol·L-1NADP、25mm

7、ol·L-1Na2G-6-P和1 U·mL-1G-6-PDH。
　　 3.3.2樣品處理及色譜條件
　　 包括檢測方法的精密度、回收率及穩(wěn)定性。
　　 3.3.3配制辛伐他汀系列標準濃度
　　 3.3.4辛伐他汀體外代謝測定
　　 4數據處理
　　 實驗結果用統(tǒng)計學軟件SPSS(10.0版,2000SPSSInc)進行分析,所得數據均用(X)±S表示雙尾F檢驗來分析各組各指標間的差異。

8、r>　　 研究結果
　　 1肝微粒體蛋白含量
　　 1.1 BSA標準曲線
　　 曲線方程為:y=0.0005x+0.1303(R2=0.9462)。
　　 1.2樣品微粒體蛋白測定結果
　　 結果顯示與生理鹽水對照組比較,低劑量銀杏葉組微粒體蛋白含量沒有明顯變化；高劑量組微粒體蛋白增加,為對照組的1.14倍(P<0.05)；陽性對照組蛋白含量顯著增加,約為生理鹽水對照組的1.7倍(P<0.05

9、)。結果見表1。
　　 表1各組肝微粒體蛋白含量的比較((x)±s,n=7)
　　 注:與生理鹽水對照組比較*p<0.05,**p<0.01。
　　 2紅霉素N-脫甲基酶(ERDase)活性測定結果
　　 與生理鹽水對照組比較,低劑量銀杏葉組ERDase活性略有增加,但沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)；高劑量組ERDase活性顯著增加,約為對照組的1.8倍(P<0.05)。結果見表2。
　　 表2各

10、組ERDase活性的比較((x)s,n=7)
　　 注:與生理鹽水對照組比較術p<0.05,**p<0.01。
　　 3辛伐他汀體外代謝測定
　　 3.1色譜情況
　　 辛伐他汀保留時間為2.5min,與反應體系中其他雜質基線分離良好。
　　 3.2辛伐他汀標準曲線
　　 曲線方程為:y=4096.7x-110.22(R2=0.9995),結果表明辛伐他汀濃度在1～10μg·mL-1的范圍

11、內線性關系良好,該法將辛伐他汀的最低檢測限定義在1μg·mL-1。
　　 3.3精密度實驗結果
　　 結果顯示10μg·mL-1；6μg·mL-1；1μg·mL-1的日內、日間的RSD分別為:1.44％、1.72％；1.57％、1.83％:2.2％、2.81％。
　　 3.4回收率實驗結果
　　 辛伐他汀濃度在1 ug·mL-1；6 ug·mL-1；10 ug·ML-1的相對回收率及相應RSD分別為:10

12、3.33％、2.2％；99.37％、1.58％:99.53％、1.44％。
　　 辛伐他汀濃度在1 ug·ML-1；6 ug·mL-1；10 ug·mL-1的絕對回收率及相應RSD分別為:96.27％、2.26％；97.18％、1.58％:97.12％、1.44％。
　　 3.5穩(wěn)定性試驗
　　 分別于1、3、7、10、14d進樣測定,辛伐他汀濃度在1、6、10μg·mL-1的RSD分別為2.10％、1.06％、

13、1.83％。
　　 3.6辛伐他汀體外反應結果
　　 結果顯示與生理鹽水對照組比較,PB組和高劑量銀杏葉組辛伐他汀體外代謝均顯著加快,差別具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而低劑量銀杏葉組與生理鹽水組比較,辛伐他汀體外代謝并沒有明顯改變(P>0.05),結果見表3。
　　 表3各組辛伐他汀體外代謝情況比較((x)±s,n=6)
　　 注:與生理鹽水對照組比較*p<0.05,**p<0.01。
　　

14、討論
　　 1細胞色素P450與藥物相互作用
　　 細胞色素P450縮寫CYP450,是一種單加氧酶,由于還原性的P450與一氧化碳的復合物在波長450nm處有最大的吸收峰而得名。CYP450參與了絕大多數藥物的代謝,是藥物代謝過程中的主要限速酶,在藥物的相互作用中扮演了重要角色。藥物在體內的代謝主要經歷兩步反應,第一步為Ⅰ相反應,其間藥物被氧化、還原或水解為極性更大的代謝物,催化Ⅰ相反應的關鍵酶即為CYP450。在CY

15、P450的大家族中與藥物代謝有關的酶主要為CYP1、CYP2、CYP3家族中7種重要的亞型:CYP1A2(占CYP450代謝總藥物的4％)、CYP2A6(2％),、CYP2C9(10％)、CYP2C19(2％)、CYP2D6(30％)、CYP2E1(2％)、CYP3A4(50％)。
　　 2銀杏葉提取物與細胞色素P450
　　 銀杏葉提取物的主要活性成分有兩大類,分別為黃酮類和萜內酯類。其中黃酮約占24％,主要包括槲皮素

16、、山萘酚、異鼠李素及其甙類化合物；萜內酯類約占6％,以銀杏內酯和白果內酯為主。有研究表明槲皮素和山萘酚可以明顯抑制CYP3A的活性,并推測其作用環(huán)節(jié)可能發(fā)生在表達后水平。另外有人在研究中發(fā)現,銀杏葉的另一類主要成分三萜內酯類化合物,銀杏內酯和白果內酯對CYP3A也呈現一定的抑制作用,照此來推測,我們較容易認為銀杏葉提取物整體應該抑制CYP3A的活性,但是國外的一項研究卻得出了完全不同的結論。
　　 3銀杏葉提取物與辛伐他汀

17、>　　 在本實驗條件下,低劑量銀杏葉制劑與辛伐他汀合用時,并沒有顯著的相互作用發(fā)生,提示兩藥在常規(guī)劑量下的合用是基本安全的；而在高劑量銀杏葉組(相當于臨床常用劑量的10倍),銀杏葉提取物則可以明顯促進辛伐他汀的體外代謝,酶學研究也表明,高劑量銀杏葉制劑可以誘導大鼠體內CYP3A的活性。綜合以上結果,可以推斷當高劑量銀杏葉制劑與辛伐他汀合用時很可能會降低辛伐他汀的血藥濃度,從而降低其不良反應的發(fā)生,但同時也可能降低辛伐他汀的療效。

18、>　　 結論
　　 在本實驗條件下,大劑量的銀杏葉提取物(相當于臨床常用劑量的10倍)對實驗大鼠肝微粒體CYP3A的活性表現出了一定的誘導作用,此作用雖弱于苯巴比妥鈉陽性組,但足以引起同CYP3A底物藥物相互作用的發(fā)生,辛伐他汀的體外代謝實驗進一步證明了這一點,因此推斷當辛伐他汀與大劑量銀杏葉提取物制劑合用時,可能會通過藥物的相互作用而影響到辛伐他汀的療效。而低劑量的銀杏葉提取物(相當于臨床常用劑量)由于對CYP3A活性及辛伐