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文檔簡介
1、目的 觀察銀杏葉提取物對糖尿病大鼠血糖、內(nèi)生肌酐清除率的影響,以及其對糖尿病大鼠腎臟脂質(zhì)過氧化、一氧化氮水平、一氧化氮合酶活性及基因表達(dá)的影響,結(jié)合腎臟的形態(tài)學(xué)改變,探討銀杏葉提取物對實驗性糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)機(jī)制。 方法 雄性Sprague-Dauley大鼠35只,隨機(jī)取10只為正常對照組。余25只禁食12h后,一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)50mg/Kg,復(fù)制糖尿病模型,模型成功20只。成模后20只大鼠隨機(jī)分成糖尿病
2、(DM)組(n=10)和銀杏葉提取物(GBE)治療組(n=10)。GBE治療組按8mg.kg-1.d-1劑量腹腔注射銀杏葉提取物注射液,正常對照組、DM組同時腹腔注射同容積的生理鹽水連續(xù)5周。處死前日,實驗大鼠置于代謝籠收集24h尿液,計量后混勻留尿8ml測定24h尿蛋白定量及尿肌酐。股動脈放血處死大鼠,收集血標(biāo)本,待測血糖、血肌酐(Scr)。同時迅速分離兩側(cè)腎臟,生理鹽水反復(fù)沖洗后稱重。取腎組織,以2.5%戊二醛、1%鋨酸雙固定,常規(guī)
3、丙酮脫水、Epon812包埋,超薄切片、染色,電鏡下觀察腎臟超微結(jié)構(gòu)。制備腎組織勻漿,RT-PCR法測定誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、神經(jīng)型一氧化氮合酶(nNOS)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表達(dá)水平。同時,以黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)活性、硫代巴比妥酸法測定丙二醛(MDA)含量,硝酸還原酶法測定一氧化氮(NO)含量、化學(xué)比色法測定一氧化氮合酶(NOS)活性。 結(jié)果 1.血糖、血肌酐、內(nèi)生肌酐清除率、
4、體重、腎肥大指數(shù)、尿蛋白DM組血糖、腎肥大指數(shù)、內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)升高,體重下降,與正常對照組比較差異有顯著意義(P<0.01),Scr、尿蛋白升高,變化無顯著差異(P>0.05)。GBE治療組血糖、腎肥大指數(shù)下降,與DM組比較差異有顯著意義(P<0.05);體重比DM組增加,但無顯著差異(P>0.05);血糖、腎肥大指數(shù)、體重與正常對照組比較差異顯著(P<0.05)。 2.腎組織脂質(zhì)過氧化和NO水平DM組腎組織SOD活性
5、下降、NOS活性升高、MDA及NO含量升高,與正常對照組比較差異有顯著意義(P<0.05)。GBE治療組,腎組織SOD活性升高、NOS活性下降、NO、MDA含量下降,與DM組比較差異均有顯著意義(P<0.05),與正常對照組比較無顯著差異(P>0.05)。 3.腎組織NOSmRNA的表達(dá)DM組腎組織iNOSmRNA、eNOSmRNA的表達(dá)增強(qiáng),nNOSmRNA的表達(dá)下降,與正常對照組比較差異有顯著意義(P<0.01)。GBE治療
6、組eNOSmRNA表達(dá)下降,nNOSmRNA表達(dá)增強(qiáng),與DM組比較有顯著差異(P<0.01),與正常對照組比較無顯著差異(P>0.05);而iNOSmRNA表達(dá)比DM組明顯下降(P<0.01),仍高于正常對照組(P<0.05)。 4.腎臟超微結(jié)構(gòu)的變化透射電鏡下觀察,正常對照組大鼠腎小球毛細(xì)血管為有孔毛細(xì)血管,內(nèi)皮細(xì)胞見不規(guī)則窗孔,基底膜厚薄均勻,球囊臟層上皮細(xì)胞表面伸出許多細(xì)而長的足突,足突間保持一定間距,貼于基底膜外側(cè);DM
7、組基底膜增厚,厚薄不均勻,部分區(qū)域呈局灶性增厚,足細(xì)胞突起腫脹、變短,并可見足突融合,球囊壁層細(xì)胞內(nèi)線粒體擴(kuò)張,腎小球內(nèi)膠原纖維增多;腎小管表面微絨毛腫脹,腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)線粒體擴(kuò)張,嵴減少。GBE治療組,基底膜基本正常,足細(xì)胞足突腫脹消退,內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)線粒體正常;腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)線粒體腫脹明顯減輕。 結(jié)論 1.GBE可提高DM大鼠腎臟SOD的活性,減少腎臟脂質(zhì)過氧化物MDA形成,從而減輕DM大鼠腎臟自由基代謝紊亂。
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