副溶血性弧菌溶血毒素基因的克隆表達(dá)及應(yīng)用研究.pdf

1、上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文副溶血性弧菌溶血毒素基因的克隆表達(dá)及應(yīng)用研究姓名：丁瑩申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：食品科學(xué)指導(dǎo)教師：潘迎捷20081113上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文接后形成的融合蛋白。通過(guò)G l u t a t h i o n eS e p h r o s e 4 B 親和柱層析純化T D H 融合蛋白。用同樣的方法構(gòu)建了t l h ／p G E X - 4 T - 1 并經(jīng)鑒定后轉(zhuǎn)化、誘導(dǎo)表達(dá)。獲得的v PA T C C 3 3 8

2、 4 6 、A T C C 3 3 8 4 7 t l h 基因測(cè)序結(jié)果與O c n B a n k 中的副溶血弧菌W P l 標(biāo)準(zhǔn)株t l h 基因序列具有1 0 0 ％的同源性。他們所編碼的蛋白質(zhì)序列也是相同的。以純化的T D H 為抗原，背部皮下注射免疫大白兔，制各抗T D H 多抗。免疫學(xué)分析證實(shí)純化的表達(dá)產(chǎn)物能被T D H 特異性抗血清所識(shí)別，當(dāng)包被的T D H為l u g ／m L 時(shí)，抗血清的E L I S A 效價(jià)達(dá)到4

3、 ．0 x 1 0 5 ，獲得效價(jià)較高的抗體。D N A序列分析和免疫學(xué)分析證明所克隆的基因是副溶血弧菌的t d h 基因，且重組菌表達(dá)的T D H 與原始菌株產(chǎn)生的T D H 抗原性一致。副溶血弧菌t d l l 基因克隆與表達(dá)。為在單因子水平上研究副溶血弧菌T D H 的毒力、致病機(jī)理以及誘導(dǎo)宿主免疫應(yīng)答方面的作用打下了基礎(chǔ)。同時(shí)為建立基于溶血毒素檢測(cè)副溶血弧菌的方法奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞副溶血性弧菌( V i b r i o p a