MiR-19b過表達對P19細胞分化的影響.pdf

1、目的:脊椎動物的心臟是胚胎發(fā)育過程中最早形成并行使功能的器官，主要來源于中胚層間充質細胞，其發(fā)生需經(jīng)過多細胞系特化、管狀結構形成、最后精確組裝成成熟4個心腔結構等發(fā)育過程，需要一系列重要的形態(tài)發(fā)生事件，包括細胞決定、細胞遷移和細胞分化等，這些過程出現(xiàn)的時空順序暗示了一種復雜的基因調控模式以保證胚胎心臟的協(xié)調發(fā)育。近年來，心臟發(fā)育的研究已經(jīng)取得了較大的進展，然而心臟疾病發(fā)生的分子機制依然不很明確，更多的分子機制研究還需要進一步的開展。mi

2、croRNA的出現(xiàn)，為我們帶來了新的研究思路。microRNA(miRNA)是一類小分子非編碼單鏈RNA，長約22個核苷酸，通過與靶mRNA3'非翻譯區(qū)(3'UTR)互補配對，抑制翻譯，從而在轉錄后水平對生物體內(nèi)基因時序性表達起到精細調節(jié)作用。近年來，大量研究表明microRNA在心臟發(fā)育、心肌肥厚、心力衰竭、心律失常以及高血壓等疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，使microRNA成為國際心血管研究領域的熱點。P19細胞在特定的條件下能

3、夠向心肌細胞分化，是研究心臟發(fā)育、基因調控的有用工具。miR-19b是通過芯片篩選出與心臟發(fā)育高度相關的一種miRNA，本研究旨在探討miR-19b過表達對P19細胞分化的影響。
　　方法:脂質體2000轉染miR-19b過表達質粒與空載質粒進入P19細胞，通過殺稻瘟菌素篩選出穩(wěn)定株;通過DMSO將穩(wěn)定表達miR-19b的細胞株進行誘導分化，應用普通倒置顯微鏡觀察細胞跳動情況;實時定量聚合酶鏈反應檢測miR-19b表達水平以及分化

4、基因(cTnT、ANP、GATA4)的表達水平。
　　結果:轉染miR-19b過表達質粒與空載質粒進入P19細胞，實時熒光定量PCR檢測證實miR-19b過表達載體與細胞系成功建立(P＜0.05);在P19細胞分化過程中，miR-19b過表達組心肌細胞分化數(shù)量增多，且miR-19b過表達組心肌標志物均顯著高于對照組（P均＜0.05）。miR-19b顯著促進P19細胞向心肌細胞分化。
　　結論:miR-19b過表達對P19細胞