自制組織芯片研究hCTR1、FHIT及PCNA在子宮頸鱗癌、CIN中表達及臨床治療意義.pdf

1、目的：子宮頸癌是婦女生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，約占所有婦科腫瘤的10％～13％，死亡率居婦女惡性腫瘤的第二位。根據(jù)世界范圍內(nèi)的統(tǒng)計，每年新發(fā)病例80％來自發(fā)展中國家。在我國，每年子宮頸癌的新發(fā)病例數(shù)超過13萬，每年死于子宮頸癌的婦女約有2萬人。子宮頸癌的發(fā)病是涉及多種因素、多個步驟的病理過程，對化學治療（化療）耐藥是導致子宮頸癌患者治療失敗的主要原因之一。研究子宮頸癌相關(guān)基因，從分子水平上了解細胞癌變機制，為子宮頸癌的早期診斷、鑒別

2、診斷及預測預后提供分子指標，具有十分重要的意義。
　　 人類銅轉(zhuǎn)運蛋白(hCTR1)被認為是人體內(nèi)具有高親和力的銅攝入蛋白。國外學者研究發(fā)現(xiàn)，銅與腫瘤細胞密切相關(guān)，很多類型的腫瘤患者的血清中含有異常高水平的銅。hCTR1也調(diào)節(jié)細胞中順鉑的含量。hCTR1在子宮頸鱗癌的表達情況將成為子宮頸癌患者治療的新的有效生物靶點。
　　 脆性組氨酸三聯(lián)體(FHIT)基因是近年來發(fā)現(xiàn)的與子宮頸癌密切相關(guān)的抑癌基因，F(xiàn)HIT基因失活與多種

3、惡性腫瘤有關(guān)，特別是那些直接與外界接觸的上皮性腫瘤的發(fā)展有關(guān)。該基因跨越人類染色體脆性部位FRA3B和家族性腎細胞癌相關(guān)染色體交叉易位t(3；8)(p14.2；424)斷裂點，是第一個將染色體脆性易位點與腫瘤相聯(lián)系的分子生物學證據(jù)。FHIT表達下降或缺失可能在子宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，其表達水平可成為評價腫瘤惡性程度的潛在指標。
　　 增殖細胞核抗原(PCNA)是一種核內(nèi)蛋白質(zhì)，是DNA聚合酶δ的輔助蛋白，參與調(diào)節(jié)

4、DNA的合成，與細胞的增殖周期密切相關(guān)，其含量反映了細胞的增殖程度，又稱為周期抗原。PCNA為增殖期細胞特異性表達的核蛋白，是目前腫瘤增殖活動研究中可靠的增殖期標志物。PCNA可成為反映CIN和子宮頸癌細胞異常增殖的靈敏標志。
　　 本課題采用組織芯片技術(shù)及免疫組化方法檢測hCTR1、FHIT和PCNA三種相關(guān)基因在子宮頸不同程度病變中的表達情況，分析hCTR1、 FHIT和PCNA的異常表達在子宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中的相互關(guān)系，

5、探討hCTR1、FHIT和PCNA與子宮頸癌臨床指標之間的相互關(guān)系。這對于了解子宮頸腫瘤的發(fā)病機制，指導子宮頸癌患者術(shù)后治療有重要意義。
　　 方法：
　　 1.收集河北省人民醫(yī)院病理科2009年6月～2010年5月宮頸組織共177例，其中子宮頸鱗癌40例，CIN組織106例(CINⅠ，34例：CINⅡ，31例；CINⅢ，41例)，正常宮頸組織31例。
　　 2.應用組織芯片技術(shù)及免疫組織化學方法(SP法)檢測子

6、宮頸鱗癌、CIN組織及正常宮頸鱗狀上皮組織中hCTR1、FHIT和PCNA蛋白的表達。
　　 3.采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，以α=0.05為檢驗水準。
　　 結(jié)果：
　　 1.組織芯片結(jié)果按課題設(shè)計及實驗方法要求共制作8x8陣列組織芯片3張，有8個位點缺失，12個位點組織無意義，其他位點均可見足夠的組織結(jié)構(gòu)。最終樣本共157例，其中子宮頸鱗癌組40例，CIN組94例(CINⅠ，27例；CINⅡ，

7、29例；CINⅢ，38例)，正常宮頸組織23例，組織位點的形態(tài)可觀測率在88.7％。HE染色均勻，無脫片、異位和皺折，顯示組織著色良好。免疫組織化學染色，陽性定位清楚，背景干凈，無掉片現(xiàn)象。
　　 2.hCTR1在子宮頸上皮不同病變中的表達在CIN和子宮頸鱗癌病例中，無論是基底層還是其他病變各層均可見細胞質(zhì)及細胞膜陽性表達，子宮頸鱗癌(87.50％)及CINⅢ(81.58％)、CINⅡ(65.52％)均明顯高于正常宮頸鱗狀上皮(

8、17.39％)、CINI(29.63％)中hCTR1的表達，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；hCTR1表達在子宮頸鱗癌中明顯高于CINⅡ(P＜0.05)；其他組之間比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 3.FHIT在宮頸上皮不同病變中的表達在正常宮頸鱗狀上皮中，F(xiàn)HIT表達陽性率100％，從正常宮頸鱗狀上皮(100％)、CINⅠ(74.07％)、CINⅡ(58.62％)、CINⅢ(34.21％)到子宮頸鱗癌(32.

9、50％)，F(xiàn)HIT表達陽性細胞逐漸減少。FHIT在各組間陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；FHIT陽性率在子宮頸鱗癌及CIN各組明顯低于正常宮頸鱗狀上皮中的表達，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；CINⅢ、子宮頸鱗癌與CINⅠ、CINⅡ之間差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 4.PCNA在子宮頸上皮不同病變中的表達在CINⅡ(55.17％)-CINⅢ(71.05％)、子宮頸鱗癌(75.00％)中PCNA陽性表

10、達，明顯高于正常宮頸組織(26.09％)，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；子宮頸鱗癌、CINⅢ與CINⅠ之間PCNA陽性率差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；子宮頸鱗癌與CINⅡ之間差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；其他組之間比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 5.子宮頸鱗癌中hCTR1、FHIT和PCNA之間的相關(guān)性分析在子宮頸鱗癌中FHIT和PCNA表達具有顯著負相關(guān)性(P＜0.05，r=-0.377)；h

11、CTR1與PCNA、FHIT的表達之間均無相關(guān)性(P＞0.05)，rhCTR1與PCNA=0.026, rhCTR1與FHIT=-0.296。
　　 6.子宮頸鱗癌中hCTR1、FHIT和PCNA表達與年齡、腫瘤大小、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及病理分級之間的關(guān)系子宮頸鱗癌FHIT低表達或缺失在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性率(11.76％)明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(47.83％)(P＜0.05)；FHIT表達與臨床分期、腫瘤大小、病

12、理分級及患者年齡均無顯著性差異；PCNA蛋白的表達與子宮頸鱗癌臨床分期及組織學分級呈正相關(guān)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽性表達率為94.12％，未轉(zhuǎn)移組中為60.67％，兩者之間有顯著性差異(P＜0.05)；hCTR1表達與患者年齡、臨床分期、腫瘤大小、病理分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間均無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.免疫組化方法檢測hCTR1蛋白的陽性表達率從正常宮頸鱗狀上皮、CIN到子宮頸鱗癌逐漸增高，可輔助

13、宮頸病變診斷，采取更積極主動的有效措施，提高宮頸癌的治愈率和生存率。
　　 2.檢查宮頸CIN中的FHIT和PCNA蛋白表達情況，可用作高級別的CIN篩查或預測；在子宮頸鱗癌中FHIT和PCNA表達具有負相關(guān)性，F(xiàn)HIT和PCNA對于子宮頸癌前病變和子宮頸癌的篩查和早期診斷具有一定的臨床參考價值。
　　 3.免疫組化方法檢測FHIT蛋白的陽性表達率從正常宮頸鱗狀上皮、CIN到子宮頸鱗癌逐漸降低；檢測PCNA蛋白陽性表達率