CIN及子宮頸鱗癌中ATP7B、Kiss-1、Skp2的表達(dá)和臨床意義.pdf

1、目的:子宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一。國(guó)內(nèi)外科研人員普遍認(rèn)為,子宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多種因素共同參與的多步驟、多基因調(diào)控的復(fù)雜過(guò)程,其中包括原癌基因的激活,抑癌基因的失活和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能失調(diào)等。
　　 P型銅轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶β鏈(ATP7B)是銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族成員之一。近年來(lái)有研究顯示,ATP7B在乳腺癌、胃癌、食管癌、肝癌及子宮內(nèi)膜癌組織中均有不同程度的高表達(dá)。提示ATP7B過(guò)度表達(dá)可能在惡性腫瘤的癌變

2、過(guò)程中發(fā)揮促進(jìn)作用。Kiss-1基因是Lee等[2]1996年發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。它定位于染色體lq3-2,Kiss-1基因在細(xì)胞生長(zhǎng)中起負(fù)調(diào)節(jié)作用,抑制增殖、促進(jìn)細(xì)胞分化成熟,與衰老及引發(fā)多余細(xì)胞進(jìn)入程序性細(xì)胞死亡有關(guān)。Skp2(S-phase kinase-associated protein2)是人類F-box蛋白家族成員之一,是泛素蛋白連接酶復(fù)合物(SCF)底物識(shí)別亞單位。一系列研究提示Skp2是一種潛在的原癌基因,

3、它在細(xì)胞周期中起重要作用,特別是在G1/S期轉(zhuǎn)變時(shí),可通過(guò)參與調(diào)控因子的泛素依賴性蛋白水解途徑來(lái)調(diào)控細(xì)胞周期。Skp2激活后即參與促進(jìn)細(xì)胞增殖和細(xì)胞癌變過(guò)程,其在細(xì)胞生長(zhǎng)中的作用與Kiss-1相反。
　　 本課題采用組織芯片技術(shù)及免疫組化方法檢測(cè)ATP7B、Kiss-1及Skp2在子宮頸不同程度病變組織中的表達(dá)情況。研究ATP7B、Kiss-1及Skp2與子宮頸不同程度病變的關(guān)系及臨床病理意義。分析子宮頸鱗癌中ATP7B、Kis

4、s-1及Skp2三者的表達(dá)有無(wú)相關(guān)性。這對(duì)了解宮頸鱗癌的發(fā)病機(jī)制;預(yù)測(cè)宮頸鱗癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移;指導(dǎo)子宮頸鱗癌的臨床診斷和治療具有重要意義。
　　 方法:
　　 1選取河北省人民醫(yī)院病理科2008年8月～2009年7月間手術(shù)切除及活檢的子宮頸組織標(biāo)本196例,制成組織芯片共得到175例有效樣本,其中正常子宮頸鱗狀上皮24例,CIN病變103例(CINⅠ34例,CINⅡ36例,CINⅢ33例),子宮頸鱗癌48例。
　　

5、 2應(yīng)用組織芯片技術(shù)及免疫組化方法(SP法)檢測(cè)正常子宮頸鱗狀上皮、CIN組織及子宮頸鱗癌中ATP7B、Kiss-1及Skp2的表達(dá)。
　　 3采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn),當(dāng)P＜0.05時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。計(jì)數(shù)資料計(jì)算陽(yáng)性率,樣本率之間的比較采用卡方檢驗(yàn),兩變量之間相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1制備組織芯片及染色結(jié)果
　　 按課

6、題要求制作芯片4張(7×7),4個(gè)位點(diǎn)缺失,15個(gè)位點(diǎn)組織無(wú)意義。其他位點(diǎn)均可見(jiàn)足夠的組織結(jié)構(gòu)。共得有效樣本175例,其中子宮頸鱗癌組48例,CIN組103例(CINⅠ34例,CINⅡ36例,CINⅢ33例),正常宮頸組織24例。HE染色均勻,無(wú)脫片、異位和皺折,顯示組織著色良好。免疫組化染色,陽(yáng)性定位清楚,背景干凈,無(wú)掉片現(xiàn)象。
　　 2 ATP7B在子宮頸上皮不同程度病變組織中的表達(dá)
　　 從正常子宮頸鱗狀上皮組織8

7、.3％(2/24)到CINⅠ17.6％(6/34)、CINⅡ30.5％(11/36)、CINⅢ54.5％(18/33)再到子宮頸鱗癌75％(36/48),ATP7B的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。ATP7B在子宮頸鱗癌及CINⅢ、CINⅡ中的陽(yáng)性表達(dá)率均高于正常宮頸鱗狀上皮及CINⅠ組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);子宮頸鱗癌、CINⅢ之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05);正常子宮頸鱗狀上皮與CINⅠ之間

8、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 3 Kiss-1在宮頸上皮不同程度病變組織中的表達(dá)
　　 Kiss-1從正常子宮頸鱗狀上皮91.6％(22/24)到CINⅠ79.4％(27/34)、CINⅡ61.1％(22/36)、CINⅢ54.5％(18/33)再到子宮頸鱗癌31.2％(15/48)陽(yáng)性表達(dá)率逐漸降低。Kiss-1在子宮頸鱗癌及各級(jí)別CIN中的表達(dá)均低于正常子宮頸鱗狀上皮,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);K

9、iss-1在子宮頸鱗癌中的表達(dá)明顯低于各級(jí)別CIN(p＜0.05);各級(jí)別CIN之間,差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05),隨級(jí)別增加表達(dá)降低。
　　 4 Skp2在子宮頸上皮不同程度病變組織中的表達(dá)
　　 從正常子宮頸鱗狀上皮組織0％(0/24)到CINⅠ44.1％(15/34)、CINⅡ63.9％(23/36)、CINⅢ89.9％(29/33)再到子宮頸鱗癌95.5％(46/48),Skp2陽(yáng)性表達(dá)率逐漸增加,其差異具

10、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。Skp2在子宮頸鱗癌及CINⅢ、CINⅡ中的陽(yáng)性表達(dá)率均高于正常子宮頸鱗狀上皮及CINⅠ組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);子宮頸鱗癌與CINⅢ之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05);正常宮頸鱗狀上皮與CINⅠ之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。各級(jí)別CIN之間Skp2的表達(dá)也存在顯著性差異(p＜0.05),隨級(jí)別增加表達(dá)增強(qiáng)。
　　 5子宮頸鱗癌中ATP7B、Kiss-1及Skp2的表達(dá)相關(guān)性分

11、析
　　 子宮頸鱗癌中ATP7B、Kiss-1及Skp2的表達(dá)之間均無(wú)顯著相關(guān)性(p＞0.05),rATP7B與Kiss-1=-0.856,rATP7B與Skp2=0.361,rskp2與Kiss-1=-0.309。
　　 6子宮頸鱗癌組織中ATP7B、Kiss-1及Skp2的表達(dá)與年齡、腫瘤大小、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況之間的關(guān)系
　　 Skp2的表達(dá)與年齡、腫瘤大小、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情

12、況之間均無(wú)顯著相關(guān)性(p＞0.05)。ATP7B的表達(dá)與年齡、腫瘤大小、分化程度均無(wú)顯著相關(guān)性(p＞0.05),ATP7B的表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況之間有顯著相關(guān)性(p＜0.05)。Kiss-1的表達(dá)與年齡、腫瘤大小、分化程度無(wú)顯著相關(guān)性(p＞0.05)。Kiss-1的表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況之間有顯著相關(guān)性(p＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1用免疫組化方法檢測(cè)ATP7B,其陽(yáng)性表達(dá)率從正常子宮頸鱗狀上

13、皮到CIN再到子宮頸鱗癌逐漸增高,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。提示ATP7B可能在子宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起了促進(jìn)作用。檢測(cè)ATP7B可為子宮頸鱗癌、CIN的鑒別診斷提供參考。
　　 2 Kiss-1陽(yáng)性表達(dá)率從正常子宮頸鱗狀上皮、CIN到子宮頸鱗癌逐漸降低,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。證實(shí)Kiss-1的失活促進(jìn)正常子宮頸鱗狀上皮細(xì)胞的癌變。檢測(cè)Kiss-1有助于對(duì)CIN病變進(jìn)行更客觀準(zhǔn)確的分級(jí)及與子宮頸鱗癌的

14、鑒別診斷。
　　 3 Skp2的陽(yáng)性表達(dá)率從正常子宮頸鱗狀上皮、CIN到子宮頸鱗癌逐漸增高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。支持Skp2激活后參與促進(jìn)細(xì)胞增殖和細(xì)胞癌變。檢測(cè)Skp2同樣有助于子宮頸鱗癌及CIN的鑒別診斷。
　　 4子宮頸鱗癌中ATP7B、Kiss-1及Skp2的表達(dá)之間無(wú)顯著相關(guān)性。不支持它們?cè)谧訉m頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展中起協(xié)同作用。
　　 5 ATP7B在子宮頸鱗癌Ⅱ期患者中的表達(dá)高于Ⅰ期,

15、其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);在子宮頸鱗癌淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)高于無(wú)轉(zhuǎn)移的患者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。Kiss-1在子宮頸鱗癌Ⅱ期患者中的表達(dá)低于Ⅰ期,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05):在子宮頸鱗癌淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)低于無(wú)轉(zhuǎn)移者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。提示抑癌基因-Kiss-1的表達(dá)缺失以及銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)增加在子宮頸鱗癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中起促進(jìn)作用。對(duì)Kiss-1及ATP7B的檢測(cè)有助于深入