22個(gè)李品種（品系）果實(shí)主要性狀分析及SRAP分子標(biāo)記研究.pdf

1、本試驗(yàn)以四川省達(dá)州市通川區(qū)、萬(wàn)源市、宣漢縣、大竹縣、開縣5個(gè)縣區(qū)的22個(gè)李品種（品系）為試材，對(duì)達(dá)州地區(qū)優(yōu)良李種質(zhì)資源果實(shí)主要性狀進(jìn)行測(cè)試，并利用相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性（SRAP）分子標(biāo)記對(duì)22個(gè)李品種（品系）親緣關(guān)系進(jìn)行了分析。主要研究結(jié)果如下:
　　1、22個(gè)李品種（品系）果實(shí)主要性狀包括外觀品質(zhì)、內(nèi)在品質(zhì)等均存在一定差異。巴山脆李果實(shí)表現(xiàn)出平均單果質(zhì)量大，糖酸比值高，可溶性固形物高的特點(diǎn)。巴山脆李果實(shí)品質(zhì)均優(yōu)于其他21個(gè)品種（品

2、系）。來(lái)自萬(wàn)源市極晚熟品種（品系）平均單果質(zhì)量、糖酸比、可溶性固形物值均極顯著低于其他地區(qū)品種（品系），總酸含量極顯著高于其他地區(qū)。來(lái)自達(dá)縣的早熟品種（品系）與其他地區(qū)未表現(xiàn)出顯著差異。中熟及中晚熟品種（品系）間未表現(xiàn)顯著差異。果實(shí)性狀存在差異，表現(xiàn)為長(zhǎng)圓形（果形指數(shù)大于1.100）、圓形（果形指數(shù)在1.000-1.100）、扁圓形（果形指數(shù)小于1.000）。
　　2、對(duì)22個(gè)李品種（品系）基因組DNA提取方法進(jìn)行了改良以及SRA

3、P-PCR體系進(jìn)行了優(yōu)化。對(duì)基因組DNA提取方法CTAB法進(jìn)行改良?？s短水浴時(shí)間，將之前水浴時(shí)間0.5h縮短為10min，增加氯仿/異戊醇(24∶1)抽提次數(shù)，將抽提次數(shù)由2次增加為3次。利用改良CTAB法得到的基因組DNA進(jìn)行電泳，電泳得到的基因組DNA帶型清晰，亮度高，點(diǎn)樣孔亮度不明顯，結(jié)果表明使用改良CTAB法得到的基因組DNA濃度高、質(zhì)量好。使用核酸蛋白儀檢測(cè)利用改良CTAB法提取的基因組DNA，結(jié)果表明22個(gè)李品種（品系）基因

4、組DNA D260nm/D280nm均在1.71-1.91之間。利用Gel-Pro analyzer軟件進(jìn)行條帶檢測(cè)，得到第9個(gè)正交設(shè)計(jì)組合的條帶數(shù)最豐富。使用正交設(shè)計(jì)直觀分析法得到，第9個(gè)正交設(shè)計(jì)組合的分?jǐn)?shù)最高。綜合兩種分析方法得到SRAP分子標(biāo)記最佳反應(yīng)體系為1.5mmol/L dNTPs、3mmol/L Mg2+、1.25μmol/L引物、0.5ng/20μL基因組DNA、0.4U/25μL TaqDNA聚合酶。
　　3、利

5、用相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(SRAP)標(biāo)記對(duì)巴山脆李及達(dá)州地區(qū)優(yōu)良脆李資源進(jìn)行了親緣關(guān)系分析，為巴山脆李品種的鑒定和其他李資源的保護(hù)及利用提供理論依據(jù)。研究結(jié)果表明:從180對(duì)引物組合中篩選出12對(duì)多態(tài)性高、擴(kuò)增譜帶清晰的SRAP引物，對(duì)22個(gè)李品種（品系）進(jìn)行擴(kuò)增，共獲得103條譜帶，其中多態(tài)性譜帶64條，多態(tài)性比率為60.34％。平均每對(duì)引物組合擴(kuò)增出多態(tài)性譜帶5.42條。12對(duì)引物組合的擴(kuò)增位點(diǎn)在達(dá)州地區(qū)李種質(zhì)資源間表現(xiàn)出較高的多態(tài)性水

6、平，其PIC值在0.2778-0.7613之間，大部分位點(diǎn)的PIC值＞0.5。利用UPGMA法構(gòu)建樹狀聚類圖，在相似性系數(shù)0.68處可將22份品種（品系）質(zhì)分成3組。聚類結(jié)果與按果形分類結(jié)果一致，與其地理位置和熟期也存在一定的相關(guān)性。在相似系數(shù)0.72處，巴山脆李單獨(dú)分為一組，證明了巴山脆李與其他試材的遺傳差異。通川8號(hào)和萬(wàn)源1號(hào)相似系數(shù)為0.8409，親緣關(guān)系最近。大竹雞心李作為試材中唯一紅色果皮材料，未單獨(dú)成為一組，表明聚類結(jié)果與果