生防細菌菌株A液體發(fā)酵工藝及其防病促生效果的研究.pdf

1、植物病害是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的大敵，約80％以上的植物病害都是由病原真菌引起的。目前對于植物病害的防治主要采用化學殺菌劑，但實踐證明，化學殺菌劑存在污染環(huán)境、產(chǎn)生抗藥性等問題?？朔@一問題的重要途徑之一就是采用生物防治，開發(fā)生物殺菌劑。 本研究擬將本實驗室自己分離的、具有自主知識產(chǎn)權(quán)的生防細菌菌株A(菌種保藏編號為CGMCC No．1982)開發(fā)為一種高效、廣譜、廉價的生物殺菌劑，為此對菌株A的液體發(fā)酵工藝及其防病促生效果進行了初步研究，

2、結(jié)果如下。 通過采用三明治法、濾紙片法、打孔法、混勻打孔等方法測定生防細菌發(fā)酵液的拮抗能力，比較了各方法的優(yōu)缺點，最終確定實驗中采用改進的新方法：雙層打孔法測定發(fā)酵液的拮抗能力。 通過對六種不同培養(yǎng)基篩選，確定了菌株A的最適培養(yǎng)基為YDC培養(yǎng)基：酵母膏10 g，葡萄糖20 g，CaCO<,3> 20 g，水1000 mL。采用均勻試驗設(shè)計和回歸分析的方法確定搖瓶培養(yǎng)最佳條件為：培養(yǎng)溫度為35℃，搖瓶裝量為12％，接種量3

3、％，初始pH值7.2。 在優(yōu)化的最佳搖瓶培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的基礎(chǔ)上，對菌株A進行了分批發(fā)酵和補料分批發(fā)酵。確定了補料分批發(fā)酵的培養(yǎng)基及發(fā)酵工藝條件。培養(yǎng)基為：葡萄糖1％，酵母膏1％，CaC031％；流加培養(yǎng)基為：1.5％葡萄糖和0.5％酵母膏的混合液；并確定了流加補料的時間及發(fā)酵周期。發(fā)酵液芽孢數(shù)可達到(3.41±0.151)×10<'9>cfu/mL。 發(fā)酵罐培養(yǎng)獲得的發(fā)酵液離心得濕菌體，將濕菌體與等質(zhì)量的CaCO3混勻

4、，50℃真空干燥30 min至粉末狀，制得菌株A干粉菌劑。干粉菌劑活芽孢含量為(2.109±0.366)×10<'11>cfu/g。儲存溫度對干粉菌劑的保存影響不大，4℃、25℃和37℃下保存180 d后，芽孢存活率均在60％左右，活芽孢含量均在10<'11>cfu/g以上。 將生防菌干粉菌劑應(yīng)用于植病生防試驗研究，發(fā)現(xiàn)生防菌對桃子灰霉病的防治效果好，對黃瓜也有較高的防病和促生作用。 鮮桃果實提前刺傷接種生防菌菌懸液，接

5、種灰霉病菌4 d后的防效仍可達90％以上；表面噴灑生防菌菌懸液，儲藏8 d后自然防病效果為55.94％，并且生防菌能在桃果實表面定殖。 浸種處理黃瓜種子，促芽生長率為19.42％。浸種和拌種處理黃瓜種子，株高、株重和苗成活率分別比清水處理提高了62.26％、56.61％，35.61％、37.67％，8.2％、8.85％。經(jīng)拌種處理的黃瓜苗，其離體葉片對黃瓜炭疽病菌的防效達77.92％。經(jīng)菌株A處理，盆栽黃瓜苗接種病菌14d后的對